磁珠法提取DNA提取方法的工作原理：磁珠法是通過裂解液裂解細胞組織樣本，從樣本中游離出來的核酸分子被特異的吸附到磁性顆粒表面，蛋白質等雜質不被吸附而留在溶液中。將攜帶核酸的磁珠移動至不同的試劑槽內，通過反復快速攪拌、混勻液體，經(jīng)過細胞裂解、核酸吸附、洗滌與洗脫等步驟，較終得到純凈的核酸。磁珠提取DNA原理：電荷的鹽離子的作用（如Na+），帶負電的磷酸基團借由解離的鹽離子（如Na+）與羧基形成離子橋，使DNA被特異性吸附到羧基磁珠表面。當PEG與鹽類被去除之后，加入水性分子，會快速充分水化DNA，解除其三者之間的離子相互作用，使得吸附到磁珠的DNA被純化出來。DNA提取需要通過加入濃鹽然后離心分離細胞碎片、消化蛋白質、脂質和RNA。北京血清DNA提取價格

RNA提取的一些問題，RNA降解：提取的材料不新鮮。新鮮組織取得后應立即置于液氮中或立即放入RNAstore試劑中，以保證提取效果。處理樣品量過大。污染了RNase。雖然試劑盒中提供的緩沖液都不含RNase，但使用過程中很容易污染RNase，應小心操作。堿裂解法提取的質粒DNA進行瓊脂糖電泳進行鑒定時，看到的三條帶分別是什么？堿法抽提得到質粒樣品中不含線性DNA，得到的三條帶是以電泳速度的快慢排序的，分別是超螺旋、開環(huán)和復制中間體（即沒有復制完全的兩個質粒連在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后過度振蕩，會有第四條帶，這條帶泳動得較慢，遠離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。北京血清DNA提取價格RNA提取需要注意使用RNase-free實驗室和試劑。

RNA提取中常見的問題：OD260/OD280比值偏低：蛋白質污染：確保不要吸入中間層及有機相。減少起始樣品量，確保裂解完全、徹底。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，則用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。苯酚殘留：確保不要吸入中間層及有機相。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時間要足夠。多糖或多酚的殘留：一些特殊的組織和植物中，多糖、多酚含量較多，這些殘留也會導致OD260/OD280比值偏低。因此，從這類材料中提取RNA時，需要注意多糖、多酚雜質的去除。設備限制：測定OD260及OD280數(shù)值時，要使OD260讀數(shù)在0.1-0.5之間。此范圍線性較好。用水稀釋樣品：測OD值時，對照及樣品稀釋液請使用10mMTris，pH7.5。用水作為稀釋液將導致比值偏低。

血清血漿MicroRNA提取：取出析出液和洗滌液，按以下操作：a)析出液：4.5mL加入25.5mL無水乙醇；9mL加入51mL無水乙醇。b)洗滌液：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。c)配制好的析出液及洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。取2.0mL離心管1支，依次加入1mL血清/血漿樣本、100μL溶液E、700μL溶液Q，上下顛倒混勻，室溫/4℃靜置20分鐘。12,000rpm4℃離心5分鐘，棄上清，收集離心管內沉淀。向沉淀中依次加入200μL裂解液、4μLRNACarrier、及20μL消化液，漩渦震蕩至沉淀完全分散，56℃水浴10分鐘。加入500μL析出液，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響RNA的提取與后續(xù)實驗。將吸附柱放入收集管內，將上述溶液轉入吸附柱內，靜置2min，12,000rpm4℃離心1min，棄收集管內廢液。DNA提取的原則，核酸樣品中不應存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子。

microRNA富集方法（只提取microRNA，不包含>200nt其它總RNA成份。）1.按照前面標準操作步驟1－5操作，直到得到上清。2.較精確估計上清體積（約600μl），加入等體積70％乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇!）（必須是室溫的），渦旋或者吹打充分混勻，不要離心。3.將混合物加入一個吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm離心30-60秒，收集濾過物。將濾過物從收集管轉移到一個新的離心管后，把吸附柱子放回空的收集管內，再加入剩下的混合物，離心，收集濾過物。合并兩次濾過物，計算體積。此時，濾過物含有microRNA,吸附柱子上面是除去了microRNA的總RNA（不包含microRNA），如果需要，可以按照前面標準操作步驟8－11操作漂洗，洗脫回收得到去除了microRNA的總RNA。DNA提取需要用冰冷的乙醇或異丙醇乙醇沉淀DNA。無錫高脂肪含量RNA提取純度高

RNA提取后可以進行反轉錄和PCR擴增。北京血清DNA提取價格

microRNA提取方法及步驟：將吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。取出吸附柱RA，放入一個RNasefree離心管中，根據(jù)預期RNA產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加30-50μlRNasefreewater（事先在100℃水浴中預熱效果更好），室溫放置1分鐘，12,000rpm離心1分鐘。如果預期RNA產(chǎn)量>30μg,加30-50μlRNasefreewater重復步驟11,合并兩次洗脫液,或者使用首先次的洗脫液加回到吸附柱重復步驟一遍(如果需要RNA濃度高)。洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高,分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產(chǎn)量比前者高15–30%,但是濃度要低,用戶根據(jù)需要選擇。北京血清DNA提取價格

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