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重慶莖環法逆轉錄報價表

來源: 發布時間:2023-07-21

莖環法逆轉錄是一種逆轉錄反應的技術,它利用莖環結構的RNA分子作為反向引物,在逆轉錄過程中特異性地擴增目標RNA分子。該技術在分子生物學和醫學研究中得到了普遍的應用,特別是在RNA的研究和檢測中具有獨特的優勢。莖環法逆轉錄技術的基本原理是利用逆轉錄酶和莖環結構的RNA作為反向引物,將RNA逆轉錄成cDNA,并在PCR反應中擴增。莖環結構的RNA分子具有較高的穩定性和特異性,可以特異性地識別和結合目標RNA分子,從而在逆轉錄反應中作為反向引物擴增目標cDNA。此外,由于莖環結構的RNA分子與目標RNA分子的堿基序列互補,因此莖環法逆轉錄技術可以避免隨機引物引起的非特異擴增。逆轉錄實驗時要記錄反應體系的溫度、時間、反應試劑的添加量等參數。重慶莖環法逆轉錄報價表

逆轉錄PCR的用途普遍,可用于分析基因的轉錄產物、檢測細胞中RNA病毒的含量、合成cDNA探針、直接克隆特定基因的cDNA序列等。如在臨床上RT-PCR可以用于遺傳病診斷、病癥檢測、檢測病人標本中的RNA病毒,如HAV、HCR、HIV等。在植物方面RT-PCR常用于研究環境脅迫對植物基因表達的影響,以及在特定的環境或生長階段中植物體不同部位基因表達的差異性。使用RT-PCR檢測分析RNA轉錄產物具有以下突出的優點:理論上可以檢測幾乎任何基因的轉錄產物;可以實現極為微量RNA樣品(ng級別)的檢測;樣品耐受性好,未經純化的粗制生物樣品也可以用于檢測。彩色逆轉錄試劑生產廠家逆轉錄PCR是較常用的逆轉錄應用之一。

RT-PCR就是逆轉錄PCR或稱為反轉錄PCR(Reversetranscription-PCR,RT-PCR),是以RNA為材料應用于PCR擴增中的一種實驗方法。首先通過逆轉錄酶將總RNA或信使RNA(mRNA)轉錄成互補DNA(cDNA)。其次TaqDNA聚合酶以cDNA為模板進行qPCR擴增。RT-PCR已被普遍應用于多種分子生物學應用中,包括基因表達分析、基因測試、RNA干擾驗證檢測、微陣列驗證、病原體檢測和疾病研究。RT-PCR的方法之一步法和兩步法:RT-PCR其操作方法分為兩種,即一步法和兩步法。一步法RT-PCR,逆轉錄同PCR擴增結合在一起,即cDNA合成與PCR擴增反應在同一管Buffer及酶中進行,一步完成。兩步法RT-PCR,RNA首先在反轉錄酶的作用下生成cDNA,再以cDNA為模板進行PCR擴增,分成兩步進行。

逆轉錄的端粒復制:對于線性基因組,其滯后鏈的末端是無法完整復制的,每次約損失30-200個核苷酸(Cells.2020Feb22;9(2).)。這樣隨著細胞分裂,端粒會持續縮短,造成復制性衰老。對于大多數體細胞來說,端粒磨損是一種控制其分裂潛力的機制,但對于需要多次增殖的干細胞來說,必須設法維持端粒長度。端粒酶(telomerase)可以通過逆轉錄過程延長端粒。端粒酶由端粒酶RNA(TERC)和端粒酶逆轉錄酶(TERT)組成。TERT使用TERC作為模板,在染色體的單鏈末端合成端粒DNA的重復序列。大多數體細胞缺乏端粒酶活性,因而容易衰老。但未分化的生殖細胞,干細胞,活化的淋巴細胞和大多數疙瘩細胞具有高水平的端粒酶活性,可以克服端粒磨損并維持無限的細胞分裂。逆轉錄酶通常具有多種活性,如逆轉錄活性、復制活性與RNA酶H活性。

逆轉錄酶的合成步驟:1、使用前每個組份輕輕混勻,然后2000rpm離心20s;2、取滅過菌且無核酸酶的0.2ml離心管,依次加入2~5μgRNAnμL;3、65℃保溫5min,然后冰浴5min;4、往3步驟中的0.2ml離心管依次加入下列組份:RNase抑制劑(40u/μL)0.5μL、10×M-MLVReactionBuffer2μL、DTT(200mM)1μL、逆轉錄酶(M-MLV)1μL;5、輕輕混勻后,然后2000rpm離心20s;6、先在37℃保溫1hr,然后70℃保溫15min;7、上述產物可立即進行下一步的PCR反應或-20℃保存。逆轉錄酶的質量控制:物理純度:在SDS-PAGE上>90%純。儲存緩沖液:20mMTris-HClpH7.5;200mMNaCl;0.1mMEDTA;1mMDTT;0.01%NP-40(一種去垢劑)和50%甘油。反應緩沖液:250mMTris-HClpH8.3;375mMKCl;15mMMgCl2;50mMDTT(以Part#M531A供應)。逆轉錄實驗過程中要注意RNA樣品的保存、純化、處理和轉錄酶的選擇。武漢快速逆轉錄酶供貨商

逆轉錄可改變RNA的信息內容,為研究RNA功能提供基礎。重慶莖環法逆轉錄報價表

逆轉錄實驗過程中要注意RNA樣品的保存、純化、處理和轉錄酶的選擇,逆轉錄實驗前要對反應體系進行無RNA和無反轉錄酶的對照。多逆轉錄酶都具有多種酶活性,主要包括以下幾種活性。①RNA指導的DNA聚合酶活性;以RNA為模板,催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物,多為色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反轉錄酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此沒有校正功能,所以由反轉錄酶催化合成的DNA出錯率比較高。②RNaseH活性;由反轉錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子,將由RNaseH從RNA5′端水解掉RNA分子。重慶莖環法逆轉錄報價表

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