外泌體可以傳遞生物分子，例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等，影響接收器細胞的表現(xiàn)型和生理活性。外泌體可通過特定的組裝和功能修飾，提高其對宿主細胞的選擇性靶向性。核酸是在外泌體中發(fā)現(xiàn)的另一組主要顆粒，即DNA和RNA，它們可以在細胞中發(fā)揮功能作用。在源自小鼠和人類肥大細胞的外泌體中發(fā)現(xiàn)了約1300種mRNA、121種miRNA和>100種小RNA，但未檢測到DNA和rRNA。在外泌體中發(fā)現(xiàn)的其他miRNA是lin-4和let-7，以及母乳中的miR-181a和miR-155。小鼠外泌體對人類細胞的刺激可以導致人類細胞中小鼠蛋白質(zhì)的合成。此外，外泌體和受體細胞的mRNA譜不同，表明mRNA被主動分選為MVB。外泌體在很多生理和病理情況下都發(fā)揮著不可或缺的作用。昆明細胞外泌體

外泌體分離方法之基于聚合物的沉淀法：基于聚合物的沉淀技術通常包括將生物流體與含聚合物的沉淀溶液混合、4℃孵育和低速離心。用于基于聚合物的沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。這種聚合物的沉淀可以對分離的外泌體產(chǎn)生溫和影響而且可以產(chǎn)生中性的pH值。由此，出現(xiàn)了幾種常見的外泌體試劑盒：比如：SystemBiosciences,MountainView,CA,ExoQuick等。研究表明，使用ExoQuick方法可以快速執(zhí)行，無需額外設備，只需用高速離心機進行超速離心可以獲得高產(chǎn)量的外泌體。但是此方法的缺點是：非外泌體材料對外泌體分離物的污染仍然是基于聚合物的分離方法的一個問題。此外，分離物中的聚合物可能會干擾下游分析。成都外泌體分離樣品前的處理對較終外泌體分離的效果有較大影響。

外泌體衍生物miRNA的重要應用：外泌體保護miRNA免于降解，使它們比游離miRNA更穩(wěn)定，并能被特定受體細胞有效整合。因此，在外泌體攜帶的貨物中，miRNA可以提供有關它們來源的細胞類型、靶標和細胞狀態(tài)的身份信息。越來越多的證據(jù)表明，疙瘩細胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進疙瘩細胞增殖、侵襲、血管生成、遠處轉(zhuǎn)移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長和轉(zhuǎn)移至關重要，因為新血管可以提供額外的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，還可以清理廢物。比如：病細胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23；外-miR-29；exo-miR-103和exo-miR-210可以促進增殖、血管生成和疙瘩轉(zhuǎn)移。

外泌體分離方法優(yōu)缺點對比：差速離心法：差速離心法仍是實驗中常用的外泌體分離技術。主要步驟如下：1.使用離心機低速離心來去除細胞與細胞碎片。2.而后增加轉(zhuǎn)速通過離心來消除樣本中較大的細胞囊泡。3.再使用高速離心機進行高速離心，通過離心沉淀的方式提取外泌體。在這里，需要注意的是生物流體的粘度與分離的外泌體的純度有較強的相關性。所以，對于高粘度的生物樣品需要超速離心機進行較長時間的離心操作。外泌體分離方法之免疫分離法：免疫芯片方法基于表面外泌體受體，用于根據(jù)來源分離外泌體。獲得的外泌體可直接分析或用于DNA或總RNA分離。外泌體胞內(nèi)蛋白可用作分離外泌體的特異性標志物。此外，基于ELISA的ExoTEST也可以用于有效分離外泌體。其原理是：使用涂有外泌體抗體的ExoTEST板，可以從各種生物體液中分離出外泌體。該方法適用于常見和細胞類型特異性外泌體蛋白的檢測、分析和定量。未來可開發(fā)更加高效和精確的外泌體分離和檢測技術。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍。二是微流控分離法，該方法通過負壓及震蕩等機械原理分離外泌體，產(chǎn)量純度均具有較大幅度提高，但需要特定設備配合。外泌體分離方法之納米粒徑分析法：確定性橫向位移依賴于顆粒流動路徑的變化，而顆粒流動路徑取決于顆粒尺寸。這種方法雖然比較簡單，但是需要使用掃描電鏡技術、動態(tài)光散射技術、納米粒子跟蹤分析技術、單粒子干涉反射成像傳感器（SP-IRIS）技術等。對于外泌體大小、形態(tài)、外泌體的濃度、zeta電位等分析也可以使用粒度分析儀。可將不同分離方法結(jié)合使用，以提高外泌體分離的效率和分離精度。南京組織提取外泌體供貨商

外泌體通過它們攜帶的間質(zhì)基質(zhì)組分，在宿主細胞中誘導上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等重要的生物學反應。昆明細胞外泌體

細胞外泌體的來源和表征方法：細胞外泌體是直徑為30-150nm的血管外囊泡亞群。在過去的20年里，科學家已經(jīng)從包括正常細胞和病細胞在內(nèi)的許多細胞類型中分離出外泌體，并且研究了它們對其他細胞的影響。外泌體是由多種大分子組成，例如核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。細胞外泌體具有天然的特定細胞靶向特性，通常被設計用于靶向大分子（DNA和RNA）和藥物遞送系統(tǒng)（多柔比星、紫杉醇和紫杉醇）。目前常用細胞外泌體的分離方法主要是超速離心法、密度梯度離心法、超濾分離法、基于聚合物的沉淀法、親和沉淀分離法、免疫磁珠法和色譜法等。昆明細胞外泌體

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