外泌體分離方法之免疫學分離方法:免疫學分離法是利用受位于外泌體膜中的選定蛋白質標記物影響的抗體對外泌體進行標記。這些標記的外泌體可以進一步輕松處理和純化,例如,使用微芯片或磁珠。磁分離后,外泌體被純化,磁珠被溶解和去除。通過這種簡單快速的方法,就可以獲得較高純度提取物,但不會分離出缺乏磁性標記抗體識別的表面標記的外泌體,這可能導致外泌體池表現效果不佳。這種方法雖然既省時又直接,輸出純度較高,但也需要較為昂貴的試劑。外泌體可以傳遞生物分子,例如蛋白質、DNA、mRNA等,影響接收器細胞的表現型和生理活性。煙臺血漿外泌體分離生產商
外泌體是直徑為30-150nm的小細胞外囊泡。在生理和病理條件下,幾乎所有類型的細胞都可以釋放外泌體,在細胞通訊和表觀遺傳調控中發揮重要作用。外泌體天然存在于體液中,包括血液,唾液,尿液和腦脊液等,內部含有其來源細胞的核酸,蛋白等物質,因此基于外泌體的疾病診斷和治著方法得到了深入的研究。但是如何拿到純凈的外泌體一直是外泌體研究所面臨的難題之一,因此研究人員也開發了許多外泌體分離的方法,來一起看一下吧。差速離心法:離心力從300×g到100,000×g的下進行多次循環離心,較后收集外泌體顆粒。密度梯度離心法:等密度梯度超速離心法是通過從下到上逐步降低密度分層。動區梯度超速離心法由兩個梯度介質部分組成,樣品根據密度/質量/大小被依次分離。合肥血液外泌體供貨商外泌體攜帶的小分子物質(如ATP、GTP等)參與細胞生命活動、代謝、細胞生長和分化等生物學進程。
在生物流體中發現的細胞外囊泡包括來自內體,多泡體的細胞外泌體(30nm至150nm)和來自質膜的微泡(150nm至1000nm)。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法除了使用高速離心機的離心分離法以外,還有色譜法、超濾過濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。#外泌體干細胞#這些細胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染,如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白,均會對獲得的外泌體生物活性產生影響。另外,分離方法也會影響細胞外泌體的純度和產量。如果要從培養基中分離外泌體,就要使用無血清培養基或無外泌體胎牛血清。
外泌體的表征分析:動態光散射:使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析儀測定外泌體制劑中的粒度分布。動態光散射測量由于溶液中粒子的布朗運動引起的散射光強度的動態波動,(685nm的激光,檢測角度為15、90、175度);較小的粒子比較大的粒子移動得更快。確定顆粒大小時,通常使用三種分布類型:(1)數量分布,報告不同大小“箱”中的顆粒數量;(2)體積分布報告不同尺寸類別的顆粒總體積;(3)強度分布,報告不同大小顆粒散射的光。也可以使用高分辨率納米粒徑分析儀NanocoulterⅠ來分析樣品中每種大小的囊泡的實際數量、濃度及粒子動態、Zeta電位等。為了進行分析,將先前儲存在-20°C的75μl等分試樣的外泌體制劑用925μlPBS稀釋(得到1ml)并轉移到一次性比色皿中用于DLS測量。外泌體分離的過程需要進行多次洗滌和離心。
外泌體分離方法之尺寸排阻層析法:尺寸排阻層析法也被稱為凝膠過濾層析法,這種方法是基于凝膠孔的大小和外泌體的大小,大于凝膠孔徑的顆粒被洗脫;反之,小于凝膠孔徑的顆粒將被抑制。凝膠過濾層析分離法總體上能獲得較高的純度和產量。建議與超濾相結合,這種方法可提供更少的蛋白質污染和更高的外泌體回收率。凝膠過濾層析分離法的缺點是凝膠的成本過高。外泌體分離方法之聲學流體分離:聲學流體分離技術利用聲場根據粒子的大小、密度和可壓縮性來分離粒子。生物樣品在此過程中不會受到損壞,并且分離的本身是非接觸式、高效的和無標記的。外泌體分離器材的選擇也對分離結果有一定的影響。福州快速提取外泌體哪家好
外泌體的定量檢測和分析可作為疾病診斷和治著中的新型指標。煙臺血漿外泌體分離生產商
CHO細胞外泌體的分離和表征:CHO細胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質生產的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術從分批培養中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡,這些分析包括動態光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標記物分析、RNA和脂質分析等。根據制造商的指南,使用TEI總外泌體分離試劑盒(Invitrogen)從培養基中分離外泌體。將細胞培養基以2000×g離心30分鐘以去除細胞和任何碎片;隨后將上清液小心移至離心管管中,加入0.5倍體積的TEI試劑,充分混合并在4°C下孵育過夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時,然后在棄去上清液后,將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲存在-20°C下,直到需要進行后續分析。煙臺血漿外泌體分離生產商
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