外泌體的表征方法：根據(jù)藥物遞送系統(tǒng)(DDS)表征外泌體結(jié)構(gòu)至關(guān)重要，因?yàn)樗鼪Q定了DDS的特性，例如細(xì)胞或組織親和力、應(yīng)激反應(yīng)、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國(guó)際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(MISEV2018)提出了外泌體（包括研究和外泌體制備）應(yīng)滿足的基本要求指南。在開發(fā)基于外泌體的DDS時(shí)，必須考慮數(shù)量、大小、形態(tài)、膜組成和蛋白質(zhì)（包括受體）等參數(shù)。這些參數(shù)表征所用的技術(shù)主要為光學(xué)、非光學(xué)和微流體技術(shù)。外泌體的表征方法之非光學(xué)方法：FTIR光譜和衰減全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌體質(zhì)量量化和脂質(zhì)和蛋白質(zhì)含量的總體估計(jì)。使用TRPS，可以同時(shí)測(cè)量大小、濃度和zeta電位。由于掃描電子顯微鏡（SEM）、透射電子顯微鏡的成本較高，近些年來，一種新型的納米粒度分析儀器在外泌體研究領(lǐng)域迅速發(fā)展，比如：粒度分析儀可以不只可以進(jìn)行單顆粒檢測(cè)，顆粒粒徑檢測(cè)還可以檢測(cè)細(xì)胞外泌體的濃度、zeta電位、形態(tài)等進(jìn)行多維度檢測(cè)。外泌體受到多種因素的調(diào)控，例如細(xì)胞膜電位、氧化應(yīng)激和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等。東莞尿液外泌體穩(wěn)定性好

CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征：CHO細(xì)胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細(xì)胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細(xì)胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測(cè)和表征分離的囊泡，這些分析包括動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測(cè)量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。根據(jù)制造商的指南，使用TEI總外泌體分離試劑盒（Invitrogen）從培養(yǎng)基中分離外泌體。將細(xì)胞培養(yǎng)基以2000×g離心30分鐘以去除細(xì)胞和任何碎片；隨后將上清液小心移至離心管管中，加入0.5倍體積的TEI試劑，充分混合并在4°C下孵育過夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時(shí)，然后在棄去上清液后，將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲(chǔ)存在-20°C下，直到需要進(jìn)行后續(xù)分析。東莞尿液外泌體穩(wěn)定性好外泌體可以作為一種新型的藥物輸送系統(tǒng)，利用其高度選擇性的靶向性，有效地提高藥物的生物利用度。

分離外泌體的方法之微流控分離：基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法，納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個(gè)系統(tǒng)都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進(jìn)行外泌體分離過程。外泌體的特異性很高，采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲，在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過壓力或通過電泳從全血中過濾外泌體，壓力的利用使分離時(shí)間更短，電場(chǎng)導(dǎo)致高外泌體純度。特異性、可重復(fù)性、低分離時(shí)間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優(yōu)點(diǎn)。

當(dāng)外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、疙瘩侵襲等方方面面。有研究表明疙瘩來源的外泌體參與到疙瘩細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了疙瘩的生長(zhǎng)與侵襲。可將不同分離方法結(jié)合使用，以提高外泌體分離的效率和分離精度。

差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理：離心管內(nèi)粒子的速度，由三種力（離心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力）的平衡決定，如：其中g(shù)eff為離心力（加速度），R為旋轉(zhuǎn)半徑，即粒子距旋轉(zhuǎn)軸的距離，ω為旋轉(zhuǎn)角頻率，d為粒子直徑，ρ為質(zhì)量粒子的密度和ρsolv和η分別是介質(zhì)的密度和粘度。在固定的離心條件（轉(zhuǎn)速和介質(zhì)成分）下，粒子速度完全由粒子的形態(tài)和密度決定。密度高于介質(zhì)密度的粒子沿離心力“向下”運(yùn)動(dòng)，而比介質(zhì)輕的粒子沿與離心力相反的方向“上浮”。對(duì)于相似的密度，較大的粒子遷移得更快。因此，在生物學(xué)中，離心主要用于按大小（差速和速率區(qū)帶離心）或按密度（等密度離心）分離不同的物體。在這項(xiàng)研究中，我們專注于使用差速離心按大小進(jìn)行顆粒分級(jí)。的外泌體分離技術(shù)采用了磁珠分離和濾膜分離的方法。腦脊液外泌體哪家劃算

外泌體在人體的主要作用是充當(dāng)局部和全身信號(hào)和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。東莞尿液外泌體穩(wěn)定性好

外泌體分離方法之親和層析分離法：在親和層析分離法方面，主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素將結(jié)合存在于外泌體表面的糖基化蛋白質(zhì)，從而使外泌體沉淀。Vn肽分離技術(shù)基于其對(duì)含有HSP的細(xì)胞外顆粒的高親和力。然而，這種方法比較容易使提取物被膜表面上含有上述標(biāo)記物的細(xì)胞和其他顆粒污染。外泌體分離方法之介電泳分離法：介電泳分離法主要利用不同大小的粒子在不均勻電場(chǎng)中的位置差異。外泌體被吸引到高電區(qū)域，而較大的顆粒將位于低電區(qū)域。該方法速度快，適合用于高通量篩選，但缺點(diǎn)是需要加熱。東莞尿液外泌體穩(wěn)定性好

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