外泌體的構成：外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年，Valadi等發現鼠的肥大細胞分泌的exosome可以被人的肥大細胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質，不只是mRNA，exosomes所轉移的microRNA同樣具有生物活性，在進入靶細胞后可以靶向調節細胞中mRNA的水平。這一發現使得研究人員對exosome的研究熱情激增，截止已經通過286項研究發現了41860種蛋白質、2838種microRNA、3408種mRNA。一類外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現于早期以及回收的核內體中，RAB7和RAB9主要出現于晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。外泌體的組成成分包括脂肪、糖、蛋白質等，對其組成成分的分析有助于了解其生物學功能和生理調節作用。紹興快速提取外泌體分離

外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法：尺寸排阻色譜(SEC)用于根據尺寸而非分子量分離大分子。該技術應用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子，該珠子含有多個孔和隧道。分子根據它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時間，而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外，該方法可以應用不同的洗脫溶液。與離心機離心方法相比，色譜分離具有較多的優勢，因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，避免了因剪切力所造成的囊泡結構改變。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術。此外，SEC方法與超濾相結合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外，流場-流分餾結合紫外分析儀和光散射檢測器已被應用于分析外泌體的大小和純度。流場-流分餾結合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質譜檢測。紹興快速提取外泌體分離外泌體分離是外泌體研究中的重要步驟。

對于外泌體的標記和鑒定，獲得外泌體之后，如何對其進行鑒定又是一個困擾研究者的問題。國際細胞外囊泡學會(ISEV)在2014年提議，對于分離獲得的外泌體需要從三個層面進行鑒定：WB檢測外泌體標志蛋白表達情況：外泌體膜上富含參與外泌體運輸的跨膜蛋白家族(CD63/CD81/CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些細胞特異性蛋白。其中CD63/TSG101是較常用到的外泌體標志物。TEM鑒定外泌體形態：電鏡具有較高的分辨率，可以直接觀察到樣品中外泌體的形態。NTA檢測外泌體粒徑及濃度：TEM可以觀察外泌體的形態學特征，但無法體現樣本中所有外泌體的粒徑分布情況及整體濃度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技術可快速準確地分析外泌體的粒徑分布及濃度，為外泌體鑒定提供有力證據。

分離外泌體的方法之超濾：它使用孔徑為50-450nm的膜過濾器從細胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過使用納米尺寸的濾膜，可以分離出目標尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續步驟，以及凝膠過濾和色譜的較后一步。超濾可以通過切向流過濾（TFF）或直流過濾（DFF）方法進行處理。DFF方法也稱為死端過濾，存在膜污染和顆粒分離受損的問題。此外，DFF只適用于小體積樣品，例如高達30mL的樣品。TFF也稱為錯流過濾是一種更快速、高效和方便的分離大規模外泌體體積的過程，TFF是樣品流體切向流過濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過程。外泌體膜表面富含糖基化蛋白和糖基化脂質，這種糖基化在外泌體相互作用和定位中具有重要作用。

外泌體分離方法之親和層析分離法：在親和層析分離法方面，主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素將結合存在于外泌體表面的糖基化蛋白質，從而使外泌體沉淀。Vn肽分離技術基于其對含有HSP的細胞外顆粒的高親和力。然而，這種方法比較容易使提取物被膜表面上含有上述標記物的細胞和其他顆粒污染。外泌體分離方法之介電泳分離法：介電泳分離法主要利用不同大小的粒子在不均勻電場中的位置差異。外泌體被吸引到高電區域，而較大的顆粒將位于低電區域。該方法速度快，適合用于高通量篩選，但缺點是需要加熱。外泌體可作為一種疙瘩標志物進行檢測，通過其生物學特征進行診斷和治著。紹興快速提取外泌體分離

外泌體的分離純化有助于其后續研究，例如外泌體功能的解析等。紹興快速提取外泌體分離

差速離心法分離外泌體的實驗原理：與等密度和梯度離心相反，差速離心從離心管內顆粒的均勻初始分布開始。在開始一輪離心過程中，位于管底部附近的一部分目標小顆粒不可避免地與較大顆粒共同沉淀。這種共沉淀導致較小顆粒的產量降低。然而，選擇大顆粒，起初位于管半月板附近，在開始一輪離心過程中可能沒有足夠的時間到達管底，從而污染較后一個離心步驟產生的小顆粒顆粒。顯然，交叉污染的程度取決于不同粒子群的相對沉降速度和離心條件。在被分離的粒子的沉降速度之間存在顯著（數量級）差異的情況下，可以有效地優化差速離心協議以獲得目標粒子群的高產量和足夠純度。此外，當不同顆粒部分之間的沉降速率只存在微小差異時，優化過程不太成功。在這些情況下，取決于離心條件。紹興快速提取外泌體分離

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