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佛山外泌體分離報價表

來源: 發布時間:2023-09-17

對于外泌體的標記和鑒定,獲得外泌體之后,如何對其進行鑒定又是一個困擾研究者的問題。國際細胞外囊泡學會(ISEV)在2014年提議,對于分離獲得的外泌體需要從三個層面進行鑒定:WB檢測外泌體標志蛋白表達情況:外泌體膜上富含參與外泌體運輸的跨膜蛋白家族(CD63/CD81/CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些細胞特異性蛋白。其中CD63/TSG101是較常用到的外泌體標志物。TEM鑒定外泌體形態:電鏡具有較高的分辨率,可以直接觀察到樣品中外泌體的形態。NTA檢測外泌體粒徑及濃度:TEM可以觀察外泌體的形態學特征,但無法體現樣本中所有外泌體的粒徑分布情況及整體濃度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技術可快速準確地分析外泌體的粒徑分布及濃度,為外泌體鑒定提供有力證據。外泌體分離的過程需要進行多次洗滌和離心。佛山外泌體分離報價表

生物試劑Tetraspanins是常見的外泌體標志物。它們包括CD9、CD63和CD81膜蛋白。Tetraspanins參與外泌體的產生。在抗原呈遞細胞中,MHC-II分子的功能通過它們整合到富含四跨膜蛋白CD9的細胞質膜區域中來調節。CD63外泌體蛋白被認為是病癥的蛋白質標志物。此外,四跨膜蛋白家族的另一成員CD81在丙型肝炎的細胞進入中起重要作用。慢型丙型肝炎患者血清中的外泌體CD81會升高,表明CD81可能是丙型肝炎染上的標志物。膠質母細胞瘤表皮生長因子受體vIII(EGFRvIII)被認為是膠質母細胞瘤的標志物。關于中樞的神經系統,在腦疙瘩者血清中分離的外泌體中也檢測到了EGFR、EGFRvIII和TGFβ。合肥血液DNA外泌體分離穩定性好優化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。

外泌體分離方法之篩分分離法:該技術是通過膜從生物液體中篩分外泌體并通過壓力或電泳進行過濾來分離外泌體。篩分分離法的分離時間較短,但分離的外泌體純度卻處于較高的水平。篩分分離法的缺點在于分離的外泌體回收率較低。總之,細胞外泌體提取、外泌體分離在疙瘩等研究領域發揮著重要作用。細胞外泌體分離方法目前多數還是采用高速離心機進行離心分離的技術方法,然而,其他幾種分離技術,如過濾法、免疫分離法和篩分法,雖然也能進行外泌體分離,但每種方法都有其局限性,多數還是只應用于實驗室、科學研究等領域。

外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法:尺寸排阻色譜(SEC)用于根據尺寸而非分子量分離大分子。該技術應用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子,該珠子含有多個孔和隧道。分子根據它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時間,而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外,該方法可以應用不同的洗脫溶液。與離心機離心方法相比,色譜分離具有較多的優勢,因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,避免了因剪切力所造成的囊泡結構改變。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術。此外,SEC方法與超濾相結合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外,流場-流分餾結合紫外分析儀和光散射檢測器已被應用于分析外泌體的大小和純度。流場-流分餾結合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質譜檢測。外泌體的分離純化有助于其后續研究,例如外泌體功能的解析等。

外泌體的表征分析:Zeta電位:通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩定性的指標(非常值)和囊泡表面電荷的量度(+或-符號)。電子顯微鏡分析:對于電子顯微鏡分析,外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋,隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網格上,并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液(2%水溶液)中進行對比,并在電子顯微鏡(Jeol1230TEM)下觀察,加速電壓為80kV,并連接到數碼相機進行觀察。外泌體可通過血液或其他體液傳播,從而在遠離原發灶的部位誘導細胞生長和轉移。東莞血漿外泌體分離蛋白檢測

分離外泌體后需要通過電鏡等方式進行鑒定。佛山外泌體分離報價表

分離外泌體的方法之靜水過濾透析:它主要有助于將整個EV從高度稀釋的溶液中分離出來,而無需超速離心過程。280Musante等人展示了用于從尿液樣本中分離EV的HFD方案。在HFD的初始步驟中,用2000×g離心樣品以去除細胞,細菌和碎片作為沉淀。然后,將上清液保存在透析膜(1000kPa)中,1000kPa或更小的顆粒相應地以靜水壓差通過膜。較后,通過離心將外泌體囊泡沉降40,000×g。在HFD分離過程中,外泌體級分在早期階段恢復,與多步離心相比,這被認為是一個優勢。與超速離心相比,HFD也被認為是一種有效的方法。佛山外泌體分離報價表