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來源: 發布時間:2023-11-17

外泌體分離方法之沉淀分離方法::基于聚合物的沉淀分離方法是利用超親水聚合物來增強小尺寸顆粒(如外泌體)的沉淀。聚乙二醇的常用濃度在8%到15%之間變化。使用這種方法,將含有外泌體的溶液與聚合物一起孵育過夜,并在約10,000×g下進一步離心。外泌體分離方法之FFF分離法:FFF目前是一種很少使用但前景不錯的一種外泌體分離方法。分離由橫流力驅動,并基于顆粒的分子量或流體動力學直徑。它包括高純度、高效率和短時間處理,但迄今為止,FFF在外泌體分離中的使用案例較少,還有待進一步開發。外泌體可通過特定的組裝和功能修飾,提高其對宿主細胞的選擇性靶向性。福州尿液外泌體多少錢

分離外泌體的方法之過濾:過濾方法只取決于分子量或組分的大小,并有助于獲得較佳的外泌體產量。超濾、凝膠過濾和靜水透析包含在外泌體分離的過濾原理下。外泌體可以根據其定義的分子量或體積排阻限,使用標準膜過濾器從其他EV組分和細胞碎片中分離出來。市售的聚偏二乙烯碳酸酯膜過濾器具有各種孔徑范圍,用于滲透、納濾和微濾應用。分離外泌體的方法之體積排阻色譜(SEC):該方法主要有助于從分離的外泌體中去除蛋白質和脂蛋白雜質,它已被用于從尿液和血漿蛋白中分離外泌體。它被用作超速離心和超濾的后續分離方法。瓊脂糖2B/CL4B、qEV和瓊脂丙烯酸S-400是通常用于凝膠過濾色譜分離外泌體的色譜柱。SEC可以在低壓下進行,這有助于分離具有完整完整性的外泌體。昆明外泌體分離RNA提取外泌體分離的過程需要進行多次洗滌和離心。

外泌體衍生物miRNA的重要應用:外泌體保護miRNA免于降解,使它們比游離miRNA更穩定,并能被特定受體細胞有效整合。因此,在外泌體攜帶的貨物中,miRNA可以提供有關它們來源的細胞類型、靶標和細胞狀態的身份信息。越來越多的證據表明,疙瘩細胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進疙瘩細胞增殖、侵襲、血管生成、遠處轉移和疙瘩微環境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長和轉移至關重要,因為新血管可以提供額外的氧氣和營養物質,還可以清理廢物。比如:病細胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23;外-miR-29;exo-miR-103和exo-miR-210可以促進增殖、血管生成和疙瘩轉移。

外泌體的分離方法:目前,有許多可用的外泌體分離方法。比較傳統的外泌體分離方法是超速離心,許多人將其視為金標準。其他技術主要基于大小排阻或抗體介導的標記外泌體分離。每種分離方法在純度、數量、效率和通量方面都不同。超速離心法分離法的缺點是外泌體結構容易發生改變,造成外泌體的結構不一致性甚至會導致外泌體受損。超濾法:超濾法使用的是微孔過濾器;因此,較大的顆粒將從濾液中排除。它可以與離心結合使用,通過初步去除細胞碎片等大顆粒來加速外泌體的純化。不過使用此方法需要防止孔隙堵,不適合大規模的樣本處理。外泌體可以通過非典型途徑進行排毒,參與細胞解掉毒和化學治著的作用。

外泌體是由正常或病理條件下的細胞所分泌,含有各種膜蛋白和胞質蛋白。因此,外泌體蛋白也可以作為生物試劑潛在地用于蛋白診斷。外泌體中發現的十種蛋白質主要包括熱休克蛋白8(HSPA8)、CD63抗原(CD63)、β肌動蛋白(ACTB)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、烯醇化酶1α、細胞溶質熱休克蛋白90α(HSP90AA1)、CD9、CD81、酪氨酸3-單加氧酶/色氨酸5-單加氧酶打開蛋白、zeta多肽(YWHAZ)、肌肉酸激酶(PKM2)。外泌體蛋白屬于各種功能組,例如四跨膜蛋白(CD9、CD63和CD81)、熱休克蛋白(HSC70和HSC90)、膜轉運蛋白(GTPases)和脂質結合蛋白。外泌體標記物及其在免疫組織化學、免疫細胞化學、流式細胞術和ELISA等抗體應用中的常用的單克隆抗體。外泌體分離是外泌體研究中的重要步驟。合肥尿液外泌體分離報價表

外泌體可通過血液或其他體液傳播,從而在遠離原發灶的部位誘導細胞生長和轉移。福州尿液外泌體多少錢

分離外泌體的方法之免疫親和相互作用:免疫親和法是利用外泌體表面蛋白(抗原)與其靶抗體或分離配體分子之間的免疫親和相互作用原理分離純外泌體的理想方法。它有助于根據其表面標志物分離特定類型的外泌體?;谖⒖装宓拿嘎撁庖呶綔y定(ELISA)是免疫親和分離試劑盒的一個例子,用于根據外泌體表面標志物分離外泌體。Tetraspanin蛋白是這種分離方法的決定因素??笴D9、抗CD63和抗CD81是免疫親和外泌體分離中使用的抗體的常見示例。免疫親和法可用于從結腸病細胞中分離外泌體,其效率高于超速離心和密度梯度分離。另外還有一種外泌體分離方法,該方法采用抗體包被的基于磁性顆粒的技術來分離外泌體。福州尿液外泌體多少錢