分離外泌體的方法之超濾:它使用孔徑為50-450nm的膜過濾器從細胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過使用納米尺寸的濾膜,可以分離出目標尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續(xù)步驟,以及凝膠過濾和色譜的較后一步。超濾可以通過切向流過濾(TFF)或直流過濾(DFF)方法進行處理。DFF方法也稱為死端過濾,存在膜污染和顆粒分離受損的問題。此外,DFF只適用于小體積樣品,例如高達30mL的樣品。TFF也稱為錯流過濾是一種更快速、高效和方便的分離大規(guī)模外泌體體積的過程,TFF是樣品流體切向流過濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過程。外泌體可作為一種新型的疙瘩治著策略,例如外泌體特異性LncRNA干擾RNA技術(shù)。杭州血液外泌體分離企業(yè)
外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法:尺寸排阻色譜(SEC)用于根據(jù)尺寸而非分子量分離大分子。該技術(shù)應用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子,該珠子含有多個孔和隧道。分子根據(jù)它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時間,而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外,該方法可以應用不同的洗脫溶液。與離心機離心方法相比,色譜分離具有較多的優(yōu)勢,因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,避免了因剪切力所造成的囊泡結(jié)構(gòu)改變。目前,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術(shù)。此外,SEC方法與超濾相結(jié)合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外,流場-流分餾結(jié)合紫外分析儀和光散射檢測器已被應用于分析外泌體的大小和純度。流場-流分餾結(jié)合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質(zhì)譜檢測。蘇州細胞外泌體分離穩(wěn)定性好外泌體與神經(jīng)系統(tǒng)的關系復雜,通過在神經(jīng)元間的轉(zhuǎn)移,參與多種神經(jīng)疾病的發(fā)生和病理機制的形成。
為了正確使用外泌體作為DDS,我們必須考慮外泌體的成分和它們的形成途徑。然后,還應描述外泌體親和力和細胞攝取的特征。外泌體載體表現(xiàn)出不同的目的和功能,這要歸功于外泌體作為基本的轉(zhuǎn)運體本身就具有出色的特性。這可以用于細胞靶向,也可以作為藥物的額外增強。迄今為止,ExoCarta在外泌體中發(fā)現(xiàn)了大約10,000種蛋白質(zhì)、3500種mRNA和超過1100種不同的脂質(zhì)。對于系統(tǒng)審查,出現(xiàn)了許多很棒的數(shù)據(jù)庫,例如Vesiclepedia和ExoCarta,其中描述了外泌體分離程序和來源以及已識別的載體。
外泌體分離方法之篩分分離法:該技術(shù)是通過膜從生物液體中篩分外泌體并通過壓力或電泳進行過濾來分離外泌體。篩分分離法的分離時間較短,但分離的外泌體純度卻處于較高的水平。篩分分離法的缺點在于分離的外泌體回收率較低。總之,細胞外泌體提取、外泌體分離在疙瘩等研究領域發(fā)揮著重要作用。細胞外泌體分離方法目前多數(shù)還是采用高速離心機進行離心分離的技術(shù)方法,然而,其他幾種分離技術(shù),如過濾法、免疫分離法和篩分法,雖然也能進行外泌體分離,但每種方法都有其局限性,多數(shù)還是只應用于實驗室、科學研究等領域。外泌體分離的過程需要進行多次洗滌和離心。
外泌體分離方法之尺寸排阻層析法:尺寸排阻層析法也被稱為凝膠過濾層析法,這種方法是基于凝膠孔的大小和外泌體的大小,大于凝膠孔徑的顆粒被洗脫;反之,小于凝膠孔徑的顆粒將被抑制。凝膠過濾層析分離法總體上能獲得較高的純度和產(chǎn)量。建議與超濾相結(jié)合,這種方法可提供更少的蛋白質(zhì)污染和更高的外泌體回收率。凝膠過濾層析分離法的缺點是凝膠的成本過高。外泌體分離方法之聲學流體分離:聲學流體分離技術(shù)利用聲場根據(jù)粒子的大小、密度和可壓縮性來分離粒子。生物樣品在此過程中不會受到損壞,并且分離的本身是非接觸式、高效的和無標記的。未來可開發(fā)更加高效和精確的外泌體分離和檢測技術(shù)。鹽城外泌體企業(yè)
外泌體在心血管系統(tǒng)中扮演著重要的調(diào)節(jié)作用,與各種疾病如心肌梗死、心衰等相關聯(lián)。杭州血液外泌體分離企業(yè)
外泌體的表征分析:動態(tài)光散射:使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析儀測定外泌體制劑中的粒度分布。動態(tài)光散射測量由于溶液中粒子的布朗運動引起的散射光強度的動態(tài)波動,(685nm的激光,檢測角度為15、90、175度);較小的粒子比較大的粒子移動得更快。確定顆粒大小時,通常使用三種分布類型:(1)數(shù)量分布,報告不同大小“箱”中的顆粒數(shù)量;(2)體積分布報告不同尺寸類別的顆粒總體積;(3)強度分布,報告不同大小顆粒散射的光。也可以使用高分辨率納米粒徑分析儀NanocoulterⅠ來分析樣品中每種大小的囊泡的實際數(shù)量、濃度及粒子動態(tài)、Zeta電位等。為了進行分析,將先前儲存在-20°C的75μl等分試樣的外泌體制劑用925μlPBS稀釋(得到1ml)并轉(zhuǎn)移到一次性比色皿中用于DLS測量。杭州血液外泌體分離企業(yè)