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來源: 發布時間:2023-11-26

外泌體的構成:除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9)、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(烯醇化酶1,醛縮酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,LDH,親環素A,FASN,MDH1和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。外泌體通過它們攜帶的間質基質組分,在宿主細胞中誘導上皮間質轉化等重要的生物學反應。深圳細胞外泌體多少錢

分離外泌體的方法之免疫親和相互作用:免疫親和法是利用外泌體表面蛋白(抗原)與其靶抗體或分離配體分子之間的免疫親和相互作用原理分離純外泌體的理想方法。它有助于根據其表面標志物分離特定類型的外泌體。基于微孔板的酶聯免疫吸附測定(ELISA)是免疫親和分離試劑盒的一個例子,用于根據外泌體表面標志物分離外泌體。Tetraspanin蛋白是這種分離方法的決定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫親和外泌體分離中使用的抗體的常見示例。免疫親和法可用于從結腸病細胞中分離外泌體,其效率高于超速離心和密度梯度分離。另外還有一種外泌體分離方法,該方法采用抗體包被的基于磁性顆粒的技術來分離外泌體。寧波血液RNA外泌體多少錢外泌體通過調節免疫系統和疙瘩微環境,在疙瘩免疫治著中的作用日益受到關注。

外泌體是直徑為30-150nm的小細胞外囊泡。在生理和病理條件下,幾乎所有類型的細胞都可以釋放外泌體,在細胞通訊和表觀遺傳調控中發揮重要作用。外泌體天然存在于體液中,包括血液,唾液,尿液和腦脊液等,內部含有其來源細胞的核酸,蛋白等物質,因此基于外泌體的疾病診斷和治著方法得到了深入的研究。但是如何拿到純凈的外泌體一直是外泌體研究所面臨的難題之一,因此研究人員也開發了許多外泌體分離的方法,來一起看一下吧。差速離心法:離心力從300×g到100,000×g的下進行多次循環離心,較后收集外泌體顆粒。密度梯度離心法:等密度梯度超速離心法是通過從下到上逐步降低密度分層。動區梯度超速離心法由兩個梯度介質部分組成,樣品根據密度/質量/大小被依次分離。

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,外泌體可通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂類等來調節受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而靶細胞細胞內的信號通路。二是在細胞外基質中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,從而打開細胞內的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。蛋白質分離方法可以用于外泌體的分離和純化。

外泌體的表征方法之光學方法:目前,光學方法是外泌體表征的主要方法,即動態光散射(DLS)、多角度光散射(MALS)和納米粒子跟蹤分析(NTA)。這些方法允許對尺寸(DLS0.5–200nm;MALS10–500nm;NTA10–1000nm)、尺寸分布和濃度進行高分辨率測量。DLS和MALS的結合增加了測量范圍(0.5–500nm)和精度。光學方法比較受歡迎的,但缺點是靈敏度低、試劑消耗高以及需要昂貴的設備。在使用納米粒子跟蹤分析NTA方法過程中,熒光染料的加入也提高了分辨率,并允許通過使用熒光標記來表征表面免疫表型。從而確定標記物存在。外泌體的轉移涉及細胞因子、基質降解酶和細胞外基質重塑等多種調節步驟。長沙血液外泌體分離供貨商

外泌體在很多生理和病理情況下都發揮著不可或缺的作用。深圳細胞外泌體多少錢

外泌體的分離方法:目前,有許多可用的外泌體分離方法。比較傳統的外泌體分離方法是超速離心,許多人將其視為金標準。其他技術主要基于大小排阻或抗體介導的標記外泌體分離。每種分離方法在純度、數量、效率和通量方面都不同。超速離心法分離法的缺點是外泌體結構容易發生改變,造成外泌體的結構不一致性甚至會導致外泌體受損。超濾法:超濾法使用的是微孔過濾器;因此,較大的顆粒將從濾液中排除。它可以與離心結合使用,通過初步去除細胞碎片等大顆粒來加速外泌體的純化。不過使用此方法需要防止孔隙堵,不適合大規模的樣本處理。深圳細胞外泌體多少錢