外泌體的表征分析:Zeta電位:通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩(wěn)定性的指標(非常值)和囊泡表面電荷的量度(+或-符號)。電子顯微鏡分析:對于電子顯微鏡分析,外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋,隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網(wǎng)格上,并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液(2%水溶液)中進行對比,并在電子顯微鏡(Jeol1230TEM)下觀察,加速電壓為80kV,并連接到數(shù)碼相機進行觀察。分離外泌體后需要通過電鏡等方式進行鑒定。成都肺泡外泌體分離生產(chǎn)商
為了正確使用外泌體作為DDS,我們必須考慮外泌體的成分和它們的形成途徑。然后,還應描述外泌體親和力和細胞攝取的特征。外泌體載體表現(xiàn)出不同的目的和功能,這要歸功于外泌體作為基本的轉運體本身就具有出色的特性。這可以用于細胞靶向,也可以作為藥物的額外增強。迄今為止,ExoCarta在外泌體中發(fā)現(xiàn)了大約10,000種蛋白質、3500種mRNA和超過1100種不同的脂質。對于系統(tǒng)審查,出現(xiàn)了許多很棒的數(shù)據(jù)庫,例如Vesiclepedia和ExoCarta,其中描述了外泌體分離程序和來源以及已識別的載體。成都肺泡外泌體分離生產(chǎn)商可將不同分離方法結合使用,以提高外泌體分離的效率和分離精度。
外泌體分離方法之尺寸排阻層析法:尺寸排阻層析法也被稱為凝膠過濾層析法,這種方法是基于凝膠孔的大小和外泌體的大小,大于凝膠孔徑的顆粒被洗脫;反之,小于凝膠孔徑的顆粒將被抑制。凝膠過濾層析分離法總體上能獲得較高的純度和產(chǎn)量。建議與超濾相結合,這種方法可提供更少的蛋白質污染和更高的外泌體回收率。凝膠過濾層析分離法的缺點是凝膠的成本過高。外泌體分離方法之聲學流體分離:聲學流體分離技術利用聲場根據(jù)粒子的大小、密度和可壓縮性來分離粒子。生物樣品在此過程中不會受到損壞,并且分離的本身是非接觸式、高效的和無標記的。
分離外泌體的方法之超濾:樣品通過0.2μm聚醚砜(PES)膜過濾,較大的顆粒物質(如細胞碎片和凋亡體)被滯留出來。然后,包括外泌體在內(nèi)的半處理濾液樣品通過TFF系統(tǒng)通過500kDa截止濾芯進行超濾過程,進料流速為120mL/min,跨膜壓力<3.5psi跨膜壓力>10:1,外泌體太大而無法通過毛孔并保持保留。相反,包括游離蛋白在內(nèi)的小分子通過中空纖維孔并作為滲透物洗脫并較終從過程中丟棄。為了獲得高質量的外泌體分離和純化,通過TFF連續(xù)重新濃縮截留物樣品,并去除小于500kDa的污染物。較后,將純化的外泌體重懸并儲存在-80°C的聚對苯二甲酸乙二醇(PETG)瓶中的0.1M蔗糖中,并用于所需的分析。通常,通過結合超濾加超速離心或離心加超濾等不同分離方法可以成功分離外泌體,使用較低孔徑的膜過濾和超速離心可提供純外泌體。外泌體在心血管系統(tǒng)中扮演著重要的調(diào)節(jié)作用,與各種疾病如心肌梗死、心衰等相關聯(lián)。
外泌體通常被認為是細胞間信號分子,包含許多蛋白質、核酸、細胞因子、轉錄因子和其他細胞來源的顆粒。外泌體不只可以向局部環(huán)境傳遞信息,還可以向距離很遠的細胞和組織傳遞信息。這可能作為一般信號和通信通路,但也可能參與致病基因擴散和惡性疙瘩進一步惡化。迄今為止,已證實外泌體存在于體液中,例如羊水、血清、母乳、附睪液、唾液、尿液、腹水和胸腔積液、支氣管肺泡灌洗液、滑液和體外細胞培養(yǎng)上清液中。細胞排出的外泌體也可作為去除不必要的蛋白質和核酸的一種方式,例如,在細胞成熟(網(wǎng)織紅細胞)或排泄系統(tǒng)(腎的內(nèi)臟和小管)期間的外泌體。外泌體被發(fā)現(xiàn)在各種生物體中,包括哺乳動物、植物和微生物。東莞腦脊液外泌體多少錢
發(fā)現(xiàn)外泌體轉移可能為疾病治著和預后提供新的治著策略。成都肺泡外泌體分離生產(chǎn)商
當外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、疙瘩侵襲等方方面面。有研究表明疙瘩來源的外泌體參與到疙瘩細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了疙瘩的生長與侵襲。成都肺泡外泌體分離生產(chǎn)商