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PolyplusPEI轉染試劑試用裝適用于Hela細胞轉染

來源: 發布時間:2024-07-19

接種細胞:轉染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。歡迎關注曼博公眾號:Mine-bio,回復“申請PEI”即可申領試用裝!如何優化PEI轉染試劑轉染時的比例?PolyplusPEI轉染試劑試用裝適用于Hela細胞轉染

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Polysciences 轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產品,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”體(proton sponge)。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966(PEI 25K)轉染效率表現優良。可申請PEI試用裝,曼博生物公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!廣東PEI轉染試劑試用裝幫助用戶更好地了解PEI轉染試劑的操作流程PEI試用裝在哪里可以申請?

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瞬時轉染方法1.接種細胞:轉染前,用膠原酶消化細胞并計數(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養的器皿,總體積如表1所示,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后快7h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定檢測時間。更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關內容歡迎咨詢上海曼博生物!

線性PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉染試劑具有如下優點:優越的轉染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質量控制每批次線性PEI轉染試劑均經過轉染測試。將eGFP表達質粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉染試劑轉入亞融合狀態的HEK-293細胞,轉染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。歡迎關注:Mine-bio,回復“申請PEI”即可申領試用裝!轉染效率好的PEI轉染試劑是哪個品牌?

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準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養基稀釋適量DNA。用同樣的培養基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養板/培養皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養基,替換成無血清培養基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養基。可關注我們的公眾號申請試用:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!PEI轉染試劑使用的時候有什么注意事項?高實用性PEI轉染試劑試用裝適用于293細胞轉染

PEI轉染試劑如何做殘留檢測?PolyplusPEI轉染試劑試用裝適用于Hela細胞轉染

PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,選擇PEI,以至于相當長的時間內,轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,所用質粒盡量去內2.轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續試驗涉及到穩定篩選,建議把血清濃度適當提高。PS:事實證明,PEI是可行的,已經做出穩定細胞系了。更多關于PEI轉染試劑相關的信息,可咨詢上海曼博生物醫藥科技有限公司!可申請PEI試用裝,曼博生物公眾號:Mine-bio,回復關鍵詞“PEI申請”,即可參加!PolyplusPEI轉染試劑試用裝適用于Hela細胞轉染