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來源: 發布時間:2024-08-11

EndoC-βH5細胞是一種新型人類胰腺β細胞解決方案,可用于開發人類糖尿病模型以及藥物篩選和驗證平臺,產生流程為:DNA構建,慢病毒載體產生,人胎兒胰腺外植體與pTRIPDU3loxP-pY-TK-RIP405-SV40-LT和pTRIPDU3loxPpY-TK-RIP405-hTERT慢病毒載體共轉導,移植到SCID小鼠的腎囊下,導致八個月后形成胰島素瘤,從而獲得EndoC-βH5。EndoC-βH1和增殖的EndoC-βH5細胞分別在Opti-β1和Ulti-b1培養基中的βCoat涂層塑料板上培養。使用胰蛋白酶(0.05%)每7天繁殖一次細胞。流式細胞術分析表明所有EndoC-βH5細胞均呈胰島素陽性,并且在絕大多數細胞中檢測到PDX1和NK6.1表達(分別為92.3%和90%)。EndoC-βH5細胞在涂層塑料上形成小的貼壁簇。接近生理學的人類胰腺B細胞模型,具有高度動態的葡萄糖刺激胰島素分泌和腸促胰島素調節。浙江糖尿病細胞模型廠家直采且穩定供應

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Human Cell Design 開發了創新且安全的人類β細胞系生產方法。首先,將每個轉導的人類胎兒胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的腎被膜下,因為該部位是人類胰腺發育的允許部位。在 6 到 8 個月內,所有移植的小鼠都發生了原發性胰島素瘤,這導致它們的血糖水平下降。與其他胰腺移植相比,原發性胰島素瘤是高度血管化的。然后將原發性胰島素瘤中這些高度血管化的區域分離,用在大鼠胰島素啟動子控制下表達 hTERT 的慢病毒進行轉導,并移植到其他 SCID 小鼠中。這些小鼠在 2 至 3 個月內出現低血糖,胰島素陽性細胞大量擴增。這種體內擴增有助于維持大量增殖的胰島素細胞,并允許定義允許的培養條件,在這種條件下,可以在體外建立永生化細胞系。Human Cell Design(HCD)開發了一種用于在人類胎兒組織中使用靶向Zhong Liu產生功能的人類β細胞系。在胰島素啟動子的控制下,用表達 SV40LT 的慢病毒載體轉導人類胎兒胰腺芽。湖南慢病毒構建型糖尿病細胞模型表達 EndoC-BH5 的 HLA-A2表示了免疫學研究的一個有價值的模型和潛在篩選平臺。

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HumanCellDesign構建了EndoC-BH1、EndoC-BH3、EndoC-βH5、GLTxEndoC-βH5、HLA-A2EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優化改良,獲得的功能胰腺B細胞,無限接近天然人源胰島B細胞,其胰島素分泌功能與天然細胞類似,基于PDX1/NKX6.1關鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上,在2.8mM和11mM葡萄糖劑量下表現出10倍的胰島素分泌反應,對GLP-1R激動劑、Exendin-4刺激產生明顯增強,且可實現批量化生成,實現穩定供應。此外,HumanCellDesign開發系列人源胰島B細胞模型EndoC-BH5的同時,開發了配套的細胞培養試劑,可用于細胞培養和后續相關實驗。

在胰島細胞刺激中,基礎和高D-葡萄糖條件之間的刺激指數為11.6±1.8。通過應用不引起胰島素分泌的L-葡萄糖(20mM)或完全阻斷D-葡萄糖誘導的鉀通道開放劑二氮嗪(100mM),驗證了胰島素分泌對D-葡萄糖的特異性。胰島素分泌以D-葡萄糖濃度依賴性方式增加,從0mMD-葡萄糖時的68.827.3增加到16.7mMD-葡萄糖時的679.2±39.5ng/h/106細胞。胰島素分泌增加Zui快的是5.5至8mMD-葡萄糖,分別有204.7±51.3和414.9±94.8ng/h/106細胞。Human cell design 構建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優化改良,獲得的功能胰腺B細胞,無限接近天然人源胰島B細胞,其胰島素分泌功能與天然細胞類似,基于PDX1/NKX6.1關鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上(左圖),在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現出10倍的胰島素分泌反應(右圖),對GLP-1R激動劑, Exendin4刺激產生明細那反饋, 且可實現批量化生成,實現穩定供應。與 EndoC-BH1 細胞相比,EndoC-BH5 細胞與原代人 B 細胞更接近。

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Human Cell Design 根據法國生物倫理立法收集人類胎兒組織,獲得法國生物醫學局(巴黎)的批準,批準號為 PFS08-005。糖尿病細胞模型應用概括如下:細胞因子介導的糖尿病炎癥反應(一/二型糖尿病):胰島β細胞保護機制研究,胰島β細胞炎癥反應研究,誘導胰島β細胞炎癥反應化合物篩選;T 細胞介導的胰島細胞殺傷實驗(一型糖尿病):胰島β細胞保護機制研究,T 細胞抑制機制,β細胞和 T 細胞作用機制研究。Human cell design 構建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰島B細胞模型。通過多輪次優化改良,獲得的功能胰腺B細胞,無限接近天然人源胰島B細胞,其胰島素分泌功能與天然細胞類似,基于PDX1/NKX6.1關鍵基因驗證的細胞均一性達到90%以上(左圖),在2.8 mM and 11 mM葡萄糖劑量下表現出10倍的胰島素分泌反應(右圖),對GLP-1R激動劑, Exendin4刺激產生明細那反饋, 且可實現批量化生成,實現穩定供應。糖尿病細胞模型EndoC-BH5 細胞表現出動態胰島素分泌以及對腸促胰島素的強烈且劑量依賴性反應。II型糖尿病糖尿病細胞模型全球200+學術與制藥實驗室測試和批準

糖尿病細胞模型可用于糖尿病炎癥研究。浙江糖尿病細胞模型廠家直采且穩定供應

Human Cell Design的細胞模型通過多輪優化和嚴格的質量控制,確保每一批次的細胞都具備高度的均一性和功能性。這些細胞不僅能夠在體外條件下長期穩定生長,還能夠在高通量篩選實驗中表現出色,為研究人員節省了大量時間和資源。HCD 的產品已成為許多科學家進行糖尿病研究和藥物篩選的工具。 Human Cell Design 不斷推動技術創新,致力于為糖尿病研究提供先進的細胞模型。其開發的 EndoC-BH5 細胞系不僅具有優異的胰島素分泌功能,還能夠模擬胰島細胞的代謝反應,為研究糖尿病的病理機制提供了重要的實驗平臺。通過與全球的科研機構合作,HCD 不斷優化其產品和服務,滿足科學家們不斷變化的研究需求。浙江糖尿病細胞模型廠家直采且穩定供應