即為本發明構建的一種pirb基因敲入的小鼠動物模型。本發明所采用第二種技術方案的特點還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結構。步驟3中grna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發明的有益效果是：本發明提供了pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構建方法，本發明的小鼠動物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗證提供了良好的基礎。分離自pirb基因敲入小鼠的細胞還可以用于研究pirb發揮調節作用的下游機制。早期階段科學假說與疾病潛在藥物治療效果評價始于小鼠疾病模型構建及其實驗室研究。咨詢疾病動物模型建模

pirb在軸突生長錐表達，位于富含肌動蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中，在神經元突起的表達呈點狀分布。文獻表明，pirb表達隨年齡增加，特別是在老齡認知損傷的小鼠海馬中，pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對海馬長時程增強的破壞作用需要pirb的參與，在ad轉基因模型中，pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失，而且介導幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們，pirb參與突觸可塑性，抑制pirb可能對ad起到***效應。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信號通路仍然未被闡明，因此迫切需要pirb的細胞和動物模型。目前對于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制劑，或者采用慢病毒轉染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響，后者慢病毒轉染在原代細胞和在體的轉染效率比較低，使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題，我們通過crispr/cas9技術建立了pirb基因敲入小鼠，將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點，為研究pirb在免疫系統或者神經系統的作用和機制提供了很好的工具。技術實現要素：本發明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動物模型。鎮江纖維化疾病動物模型建模可以簡化實驗操作和樣品收集。

1、動物模型名稱：FSH聯合HCG致超排懷孕小鼠模型2、實驗動物種屬：KM小鼠或NIH小鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：3~4周齡5、實驗動物體重：16~18g6、實驗動物環境：SPF級1、實驗方法：注射用重組人促卵泡***（FSH）聯合注射絨促性素（HCG）誘導。對雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液，注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液，并于注射HCG當天下午約16：00~17：00按雌雄鼠1：1合籠。次日早上檢查雌鼠陰栓情況。2、檢測標準：合籠后次日雌鼠檢查出現陰栓，表明成功構建了超排懷孕小鼠模型。

pirb在軸突生長錐表達，位于富含肌動蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中，在神經元突起的表達呈點狀分布。文獻表明，pirb表達隨年齡增加，特別是在老齡認知損傷的小鼠海馬中，pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對海馬長時程增強的破壞作用需要pirb的參與，在ad轉基因模型中，pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失，而且介導幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們，pirb參與突觸可塑性，抑制pirb可能對ad起到效應。疾病動物模型建模實驗室。

2mg組、4mg組、6mg組lh水平均上升，同樣，只有2mg組有明顯升高(p＜)，如圖3所示。表3表4②體重變化：(mean±sd)，如圖4所示：2mg組(連續注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第2天開始)。3mg組(連續注射7天)與空白組相比，大鼠體重***下降(p＜，注射第4天開始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg組(第1、8天注射)與空白組相比，大鼠體重分別在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg組體重在停止給藥后4天與空白組無差異。③卵巢重量：如表5、圖5所示，2mg、6mg組大鼠在經過順鉑注射后卵巢重量相比對照組，都有不同程度縮減，其中2mg組卵巢重量明顯減輕(p＜)，4mg、6mg組無明顯差異。表5④動情周期觀察(陰道涂片)：3mg組動物死亡時間早，無完整的動情周期。如表、圖6所示。正常大鼠動情周期4-5天。分為四個階段，動情前期：撇圓形有核上皮細胞占絕大多數，白細胞和角化上皮細胞很少(圖a)。動情期：角化上皮細胞占多大多數，由散在增至集白細胞和有核上皮細胞很少(圖b)。動情后期：片狀角化上皮細胞，有核上皮細胞和白細胞3種都有，無太大差異(圖c)。動情間期：白細胞占絕大多數，有核上皮細胞和角化上皮細胞很少(圖d)。表6⑤病理結果：如圖7所示。如何定義好的小鼠疾病模型？上海品質好的疾病動物模型建模

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其可與dna鏈交叉連接，顯示出細胞毒作用。溶解后在體內無需載體轉運，即可通過帶電的細胞膜。由于細胞內氯離子濃度低(4mmol/l)，氯離子為水所取代，電荷呈陽性，具有類似烷化劑雙功能基團的作用，可與細胞核內dna的堿基結合，形成三種形式的交聯，造成dna損傷，破壞dna復制和轉錄，高濃度時也抑制rna及蛋白質的合成。順鉑具有抗*譜廣、乏氧細胞有效、作用性強等優點，已普遍用于***睪丸*、卵巢*、子宮*、膀胱*、頸部*、前列腺*、腦*等，療效***。但順鉑用于****有一定的毒性，會引起副作用，與卵巢的損害有直接關系，有研究表明順鉑可誘導卵巢細胞凋亡。咨詢疾病動物模型建模

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