pcrmix:反應(yīng)條件:pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳鑒定結(jié)果如圖3所示,從圖3中可以看出,6、8、9號(hào)為pirb基因敲入小鼠在、,wt小鼠pcr產(chǎn)物沒(méi)有這兩個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物。(c)短鏈pcr反應(yīng),引物如下:primers(℃):forwardprimer(f4):5’-aacaatcaggctgccgaatctg-3’reverseprimer(r4):5’-ctttattagccagaagtcagatgc-3’expectedpcrproduct:targetedallele:344bppirb基因敲入型小鼠能夠擴(kuò)增出344bp的產(chǎn)物,而野生型沒(méi)有。pcr體系:反應(yīng)條件:(2)f1代小鼠測(cè)序:通過(guò)pcr擴(kuò)增后測(cè)序鑒定小鼠基因型,如圖4所示,為6號(hào)pirb基因敲入小鼠測(cè)序峰圖,pcr所用引物如下:sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer(r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’(3)southern雜交檢測(cè)f1代小鼠基因型:采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割dna分子,切割示意圖如圖5。具體的southern雜交檢測(cè)過(guò)程如下:步驟a、提取f1代小鼠尾部dna;步驟b、制備探針,通過(guò)pcr方法將dig-dutp滲入到步驟a的dna分子中。動(dòng)物疾病模型廣泛應(yīng)用于疾病機(jī)制研究。虹口區(qū)成瘤疾病動(dòng)物模型建模
腰椎間盤(pán)突出是造成全球大部分地區(qū)工作缺失和活動(dòng)受限的主要疾病,隨著日常生活節(jié)奏的不斷加快,腰椎間盤(pán)突出癥已經(jīng)成為臨床脊柱外科的常見(jiàn)病和多發(fā)病,而且發(fā)病人群越來(lái)越呈現(xiàn)年輕化及普遍化的趨勢(shì)。該病主要是由于腰椎長(zhǎng)期的受力不均或突然性外傷,導(dǎo)致腰椎纖維環(huán)出現(xiàn)變形、破裂,纖維環(huán)、髓核及軟骨終板單獨(dú)或同時(shí)外突,從而壓迫到坐骨神經(jīng)、神經(jīng)根或馬尾神經(jīng),患者出現(xiàn)腰部疼痛,牽連股部,下肢足部放射性疼痛,引起神經(jīng)功能、運(yùn)動(dòng)功能障礙,特定身體部位出現(xiàn)麻痹或癱瘓癥狀。良好的腰椎間盤(pán)突出動(dòng)物模型的建立,可以生動(dòng)直觀的幫助醫(yī)療工作者理解腰椎間盤(pán)突出壓迫神經(jīng)后,神經(jīng)的病理生理變化以及疾病的發(fā)***展規(guī)律,并可以通過(guò)成熟的動(dòng)物模型,探索有效的***方法。近年來(lái),隨著對(duì)腰椎間盤(pán)突出癥的認(rèn)識(shí)研究的不斷深化,人們希望通過(guò)建立一種可靠、有效的腰椎間盤(pán)突出的動(dòng)物模型,通過(guò)施加干預(yù)因素,更加準(zhǔn)確地觀察模型體內(nèi)產(chǎn)生的變化,探究人體內(nèi)疾病發(fā)生機(jī)理,并將研究成果推廣到臨床,為***腰椎間盤(pán)突出癥提供合理、有效的防治手段。因此。浦東新區(qū)呼吸疾病動(dòng)物模型建模動(dòng)物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面!
配制成6mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實(shí)驗(yàn)建立大鼠卵巢早衰模型1.實(shí)驗(yàn)儀器及材料:如表1所示。表12.實(shí)驗(yàn)方法:①動(dòng)物信息:sd大鼠,雌性,6-8周,體重180-220g。普通環(huán)境飼養(yǎng),滅菌飼料飼養(yǎng),自由飲水。②分組及給藥劑量:如表2所示。表2③給藥途徑及頻率:腹腔注射;2mg、3mg組連續(xù)注射7天;4mg、6mg組***天、第八天注射;對(duì)照組連續(xù)7天注射生理鹽水。④病理檢測(cè):末次注射后15天,動(dòng)物麻醉,采集血液,分離血清,elisa法測(cè)定血清中e2、fsh、lh水平變化情況。解剖動(dòng)物,取卵巢組織稱(chēng)重,對(duì)大鼠的卵巢組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察。注射期間每天稱(chēng)重,給藥后每周稱(chēng)重兩次,每天進(jìn)行陰道涂片檢測(cè)動(dòng)情周期。3.統(tǒng)計(jì)方法:采用graphpad進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有計(jì)量資料均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示采用單因素方差分析各組間均值的差異,p<。4.試驗(yàn)結(jié)果:(3mg組注射完成后*存活一只,不進(jìn)行統(tǒng)計(jì))如表3、表4、圖1、圖2、圖3所示:①***水平:與空白組相比,2mg組、4mg組、6mg組e2水平均降低,但是只有2mg組有明顯降低(p<),如圖1所示;與空白組相比,2mg組、4mg組、6mg組fsh水平均上升,只有2mg組有明顯升高(p<),如圖2所示;與空白組相比。
可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和修飾。本發(fā)明對(duì)試驗(yàn)中所使用到的材料以及試驗(yàn)方法進(jìn)行一般性和/或具體的描述。雖然為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的所使用的許多材料和操作方法是本領(lǐng)域公知的,但是本發(fā)明仍然在此作盡可能詳細(xì)描述。下述實(shí)施例中所涉及的儀器、試劑、材料等,若無(wú)特別說(shuō)明,均為現(xiàn)有技術(shù)中已有的常規(guī)儀器、試劑、材料等,可通過(guò)正規(guī)商業(yè)途徑獲得。下述實(shí)施例中所涉及的實(shí)驗(yàn)方法,檢測(cè)方法等,若無(wú)特別說(shuō)明,均為現(xiàn)有技術(shù)中已有的常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法,檢測(cè)方法等。實(shí)施例1:建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下:將%氯化鈉溶液50ml加入規(guī)格為10mg的醫(yī)用順鉑(齊魯制藥,批號(hào):aa1a8029a)中,配制成2mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg連續(xù)腹腔注射7天。實(shí)施例2:建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下:將%氯化鈉溶液(齊魯制藥,批號(hào):aa1a8029a)中,配制成3mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg連續(xù)腹腔注射7天。實(shí)施例3建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下:將%氯化鈉溶液25ml加入規(guī)格為10mg的醫(yī)用順鉑(齊魯制藥,批號(hào):aa1a8029a)中,配制成4mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實(shí)施例4:建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下:將%氯化鈉溶液(齊魯制藥,批號(hào):aa1a8029a)中。開(kāi)展小鼠疾病模型初步研究分析小鼠疾病模型研究初步結(jié)果與生物學(xué)信息資料等相關(guān)知識(shí)間的差距!
1、動(dòng)物模型名稱(chēng):放血致失血性貧血小鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:KM小鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雌雄不限4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:約4周齡5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:18~22g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí) 1、實(shí)驗(yàn)方法:眼眶靜脈叢放血法。小鼠通過(guò)眼眶靜脈叢放血,0.5mL/只,并測(cè)外周血紅細(xì)胞總數(shù)(RBC)及血紅蛋白含量(Hb)。24h后所有小鼠眼眶靜脈叢**檢測(cè)外周血RBC總數(shù)及Hb含量。2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):模型組小鼠放血后24小時(shí)的外周血RBC總數(shù)及Hb含量較放血前明顯下降,低于正常值參考值,且與正常對(duì)照組比較具***性差異(P<0.05),表明成功構(gòu)建了失血性貧血?jiǎng)游锬P驮炷!?梢試?yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)材料的可比性。視覺(jué)疾病動(dòng)物模型建模廠家
什么是疾病動(dòng)物模型建模?虹口區(qū)成瘤疾病動(dòng)物模型建模
pirb在軸突生長(zhǎng)錐表達(dá),位于富含肌動(dòng)蛋白的前緣和synapsin免疫陽(yáng)性的囊泡中,在神經(jīng)元突起的表達(dá)呈點(diǎn)狀分布。文獻(xiàn)表明,pirb表達(dá)隨年齡增加,特別是在老齡認(rèn)知損傷的小鼠海馬中,pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對(duì)海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)的破壞作用需要pirb的參與,在ad轉(zhuǎn)基因模型中,pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失,而且介導(dǎo)幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們,pirb參與突觸可塑性,抑制pirb可能對(duì)ad起到***效應(yīng)。但是在cns,pirb的功能和下游抑制性信號(hào)通路仍然未被闡明,因此迫切需要pirb的細(xì)胞和動(dòng)物模型。目前對(duì)于pirb基因功能的研究,多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide,pep)和抑制劑,或者采用慢病毒轉(zhuǎn)染。前者受到是否能夠透過(guò)血腦屏障和抑制劑效率的影響,后者慢病毒轉(zhuǎn)染在原代細(xì)胞和在體的轉(zhuǎn)染效率比較低,使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問(wèn)題,我們通過(guò)crispr/cas9技術(shù)建立了pirb基因敲入小鼠,將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點(diǎn),為研究pirb在免疫系統(tǒng)或者神經(jīng)系統(tǒng)的作用和機(jī)制提供了很好的工具。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:本發(fā)明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型。虹口區(qū)成瘤疾病動(dòng)物模型建模
上海東寰生物科技有限公司是一家經(jīng)營(yíng)范圍為:從事生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢(xún)、技術(shù)服務(wù)。化工產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品、煙花爆竹、民用物品、易制毒化學(xué)品)的銷(xiāo)售。【依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)后方可開(kāi)展經(jīng)營(yíng)活動(dòng)】。的公司,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實(shí)、誠(chéng)實(shí)可信的企業(yè)。上海東寰生物擁有一支經(jīng)驗(yàn)豐富、技術(shù)創(chuàng)新的專(zhuān)業(yè)研發(fā)團(tuán)隊(duì),以高度的專(zhuān)注和執(zhí)著為客戶提供原代細(xì)胞,細(xì)胞增殖與凋亡,細(xì)胞檢測(cè)試劑盒,動(dòng)物疾病模型。上海東寰生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶產(chǎn)品上的貼心,為用戶帶來(lái)良好體驗(yàn)。上海東寰生物始終關(guān)注自身,在風(fēng)云變化的時(shí)代,對(duì)自身的建設(shè)毫不懈怠,高度的專(zhuān)注與執(zhí)著使上海東寰生物在行業(yè)的從容而自信。