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吉林ArcticZymes高鹽核酸酶70921

來源: 發布時間:2024-02-20

一個美國客戶做了對照實驗,比較Benzonase和SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率。實驗設計如下,HEK293細胞轉染及培養后,分別取了150Million的293細胞進行裂解,分別在各自適宜的條件下(即SAN HQ組反應條件為500mM鹽濃度,而Benzonase組反應條件是150mM鹽濃度)加入等量的酶(0、2kU、3kU、4kU、5kU、6kU),37°孵育1hr,加入Picogreen染料后檢測DNA的殘留量。結果發現,SAN HQ高鹽核酸酶組用更少的酶得到了更好的去除效果(即2kU的SAN HQ消化結果明顯優于6kU的Benzonase),且SAN HQ的高純化效率是非血清型依賴的。使用Benzonase時,不能把載體表面的DNA去除徹底,因而不能阻止純化的病毒載體聚集。吉林ArcticZymes高鹽核酸酶70921

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ArcticZymes Technologies有兩條產品線,分別針對分子診斷和生物藥物生產兩個領域。在分子診斷領域,產品有蝦堿酶(SAP)、UNG酶、等溫擴增酶(IsoPol)、連接酶、蛋白酶、內切核酸酶及外切核酸酶等,涉及核酸抽提、擴增及測序等應用。在生物藥物生產領域,全球創新的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases, SANs)系列產品以其獨特優勢,在細胞基因藥物及RNA藥物生產中表現出更好的性能。其中,鹽活性核酸酶SANs系列產品包含兩款產品,分別是SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶;兩款酶的差別在于發揮酶活的鹽濃度范圍分別是生理鹽濃度范圍和400-600mM高鹽濃度范圍。吉林ArcticZymes高鹽核酸酶70921SAN HQ應用于生產工藝流程中,有效去除核酸污染;截止目前,已用于全球20+臨床項目中。

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殘留的宿主DNA是生產中產生的雜質,其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風險。相關研究表明,基因的大小普遍在200bp以上,因此大于200bp有可能會有一定的致病性,而且殘留DNA片段越大,生物制品的風險等級越高。因此,各國監管機構對其提出了嚴格要求。美國食品藥品監督管理局(FDA)在《關于人類基因zhiliao新產品生產指導文件》中明確指出HCD的片段要小于200bp。2022年5月,國家藥品監督管理局藥品評審中心(CDE)發布的《體內基因藥物產品藥學研究與評價技術指導原則(試行)》中也明確指出需對DNA殘留量和殘留片段大小進行控制,建議盡量將DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。

ArcticZymes Technologies于2017年推出了SAN HQ高鹽核酸酶及其對應的SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中SAN HQ高鹽核酸酶的殘留含量,特異性的anti-SAN作為捕獲抗體偶聯在96-well plate,生物素Biotin標記anti-SAN作為檢測抗體,鏈霉親和素-HRP偶聯物起到信號放大作用,TMB是終反應底物。該試劑盒特異識別SAN HQ高鹽核酸酶,對其它核酸酶沒有特異性結合。它的定量范圍是0.4-25.6ng/ml,檢測精確度高RSD<=15%,2-8℃條件下保存12個月。SAN HQ高鹽核酸酶促進殘留DNA的消化,有助于符合FDA要求。

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ArcticZymes Technologies提供獨特特性的鹽活性核酸酶(Salt Active Nucleases,SANs)系列產品,主要包含SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶。這兩款酶都是非特異核酸內切酶,跟Benzonase一樣能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈、線狀、環狀)的DNA和RNA;都來自于深海microbes,通過Pichia pastoris發酵生產得到。這兩款酶的區別在于發揮酶活的適宜鹽濃度不同,——M-SAN HQ中鹽核酸酶的適宜鹽濃度在175mM-250mM,而SAN HQ高鹽核酸酶的適宜鹽濃度在400mM-600mM。SAN HQ高鹽核酸酶的改善效果與血清型無關。吉林ArcticZymes高鹽核酸酶70921

SAN HQ高鹽核酸酶在高鹽濃度下活性更適,DNA去除效率更高。吉林ArcticZymes高鹽核酸酶70921

在不同的鹽濃度條件下,AAV病毒載體的存在形式不同。低鹽濃度條件下,AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結合到HCD上,從而產生病毒顆粒團聚現象。隨著溶液鹽濃度上升,AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞,AAV病毒顆粒會逐漸解離。當鹽濃度升到更高范圍(>400mM左右),AAV病毒顆粒與HCD的結合更弱,AAV顆粒更穩定。因此,在高鹽濃度溶液中,AAV顆粒更加穩定,且有數據表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力。所以,我們推薦提高AAV病毒生產中的鹽濃度。吉林ArcticZymes高鹽核酸酶70921

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