其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細表征和監測關鍵質量屬性,例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開發和穩定性研究相關的大量樣品通常通過液相色譜質譜 (LC-MS) 進行分析。然而,在LC-MS之前進行足夠規模的樣品制備通常具有挑戰性。為了解決樣品制備的挑戰,Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR(IdeS)固定在磁性瓊脂糖珠上,現在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上,可同時快速自動消化多種抗體,促進中級表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實驗和操作時間,降低樣品處理錯誤的風險,同時提高通量。Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR(IdeS),為客戶提供了許多選擇,滿足他們的需求。江西GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切
Genovis是一家瑞典生物技術公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學工具,主要用于生物制藥行業和學術界。我們在全球范圍內提供創新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發、生產和質量控制。您可以在我們的網站上“Application頁面”獲得更多應用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個“SmartStories”,也可以聯系我們。青海FabRICATOR ZIdeS蛋白酶GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 18 kDa。
與IdeS不同,為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產物,用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質消化該蛋白質,該蛋白由與瓊脂糖珠共價偶聯的GlySERIAS酶組成。通過將酶偶聯到樹脂上,可以增加酶與蛋白質的比率,從而可以進一步加速反應,以獲得更完整的連接子消化。此外,該酶不會存在于樣品制備中,可能會干擾樣品分析。為了進行比較,度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過夜,或用GlySERIAS凍干1小時并在37°C下過夜消化。 為了降低樣品復雜性,使用內切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖,并減少鏈間二硫鍵。通過反相LC-MS對樣品的分析表明,GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結構域中的連接子,留下了接近均質的Fc/2產物,其中含有來自連接子的一個絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時或過夜消化,兩者都會產生幾種 Fc 產物,并附著不同數量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個樣品中以兩種變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質Fc/2能夠詳細研究特定于Fc區域的質量屬性。此外,在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補充,Fc/2 產物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子,有助于研究位于 GS 連接子的修飾。
Genovis酶的適應性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法,這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進,在表征實驗室中有更大的能力進行更多類型的分析,或者在工藝開發或QC實驗室中有更先進的分析儀器。 當涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時,例如克隆篩選,工藝開發和驗證以及穩定性研究,這是非常好的。 此外,Genovis產品的效率、健壯性(Robust)和易用性使它們更容易應用于這些類型的工作,而且,也適用于受控環境中的批次放行方法。Genovis的產品很好地支持這種類型的工作,這也促使Genovis不斷推出新產品和現有產品的不同形式,以支持客戶的工作。生成完整的 Fab片段或從依那西普上的融合TNFR結構域中分離 Fc。
蛋白酶用于生成肽,用于質譜分析蛋白質。這些應用包括蛋白質組學和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導的偽影,傳統的蛋白酶并不總是理想的,因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶,可將蛋白質 C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比,所得肽更長,并可能導致序列覆蓋率增加。質譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質量的數據集和避免復雜的數據解釋至關重要。作為模型底物,使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性,即使在長時間孵育過夜后,酶與底物的比例也很高(1:5)。然而,ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性,但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1:20 和過夜孵育下,證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下,GingisREX未檢測到這種情況。數據證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性,并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。自動抗體亞基分析可減少操作人員的時間和樣品處理錯誤的風險,并提高通量。四川GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切
該酶對具有突變鉸鏈區域的抗體(如 LALA 突變)具有活性。江西GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切
與IdeS不同,Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1,而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產生完整且均質的Fab和Fc片段。IgASAP酶能夠生成完整的單價Fab片段以及IgA的中級分析,從而促進IgA的表征,例如,在疫苗、zhiliao和診斷的開發過程中。獨特的酶促工具,可實現IgA的中級表征和質量控制;生成均相的Fab和Fc片段,并保留免疫反應性;高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個消化位點。江西GlySERIASIdeS蛋白酶抗體酶切