與IdeS不同，Romiplostim 由四個相同的血小板生成素 （TPO） 受體結合肽和一個 Fc 片段組成，通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜，或用 GlySERIAS 凍干 1 小時并在 37°C 下過夜消化該蛋白質。 鏈間二硫鍵被還原，以便于通過反相LC-MS進行以下分析。與度拉糖肽的觀察結果類似，用固定化酶消化產生均質的 Fc/2，剩下一個連接子殘基，此處為甘氨酸殘基。這有助于識別專門位于Fc區域的修改。用凍干酶消化 1 小時得到 Fc/2，剩余 4 個甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個 TPO 肽連接。另一方面，這使得研究 Fc/2 和第yi個肽之間的連接區域成為可能，而不會受到第二個肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產生 2 個 Fc/2 變體，分別剩下 4 個和 1 個甘氨酸殘基。根據消化時間的不同，使用凍干產物釋放的肽以五或七種變體存在，接頭中殘留的甘氨酸殘基數量不同，而使用固定化產物釋放的肽以四種變體存在。Genovis的FabULOUS （SpeB） 是一種半胱氨酸蛋白酶。河南FabULOUSIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對其他物種的 IgG 也有活性，包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此，FabRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區域的突變敏感，并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成，與 FabRICATOR 相比，FabRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而，小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列，并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類，FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。青海FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶IdeS蛋白酶普遍適用于常見類型抗體，由于分析的簡單性，中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。

用于IgA1和IgA2m1以上鉸鏈消化的凍干酶。與IdeS不同，Genovis提供的IgASAPSub1+2在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1和IgA2m1，產生完整且均勻的Fab和Fc片段。由于人IgA1的鉸鏈比IgA2的鉸鏈長，因此IgA1和IgA2m1之間來自消化位點的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育時間為過夜（16-18小時），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風險。該酶在pH值為6.0至8.0時具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可產生活性。活性為37°C。IgASAPSub1+2是從丹毒梭菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為131kDa。IgASAPSub1+2凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1和IgA2m1。

與IdeS不同，Genovis的FabULOUS（SpeB）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在來自多個不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區域消化，產生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化，產生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點是......KTHT...例如，制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結構研究。對來自多個物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區域的消化物；快速-在一小時內生成Fab和Fc片段；有效消化小鼠IgG1。FabULOUS來源于化膿性鏈球菌，在大腸桿菌中表達。FabULOUS的分子量為29kDa，該酶含有His標簽。Genovis的FabDELLO酶在底物（包括LALA和LFLE突變的IgG1)上的有效性。

與IdeS不同，為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質消化該蛋白質，該蛋白由與瓊脂糖珠共價偶聯的GlySERIAS酶組成。通過將酶偶聯到樹脂上，可以增加酶與蛋白質的比率，從而可以進一步加速反應，以獲得更完整的連接子消化。此外，該酶不會存在于樣品制備中，可能會干擾樣品分析。為了進行比較，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過夜，或用GlySERIAS凍干1小時并在37°C下過夜消化。 為了降低樣品復雜性，使用內切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖，并減少鏈間二硫鍵。通過反相LC-MS對樣品的分析表明，GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結構域中的連接子，留下了接近均質的Fc/2產物，其中含有來自連接子的一個絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時或過夜消化，兩者都會產生幾種 Fc 產物，并附著不同數量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個樣品中以兩種變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質Fc/2能夠詳細研究特定于Fc區域的質量屬性。此外，在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補充，Fc/2 產物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子，有助于研究位于 GS 連接子的修飾。Genovis的策略是幫助客戶進行亞基分析，特別是我們的蛋白質酶切產品，如IdeS蛋白酶。浙江FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學

GlySERIAS酶能夠分離多功能融合蛋白的各個結構域，以促進表征并增加對這些分子的理解。河南FabULOUSIdeS蛋白酶抗體酶切

對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應用，需要在抗體鉸鏈處進行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細優化，以極大限度地降低多個消化位點的風險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點，可從人 IgG1 生成均質的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結晶和高階結構 （HOS） 的 NMR 研究、結合研究等。在這里，我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化，用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結構域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下特異性受到負面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率，在加入SDS上樣緩沖液之前，停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。河南FabULOUSIdeS蛋白酶抗體酶切