Genovis提供具有低水平內Du素的FabRICATOR（IdeS）凍干酶，用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以凍干粉的形式提供兩種不同規格：2000和5000單位，分別用于消化2mg或5mgIgG。該產品配方每瓶的內Du素含量較低，2000單位小瓶的內Du素含量為<0.04EU/瓶，5000單位小瓶的內Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化，內DU素水平低；適用于靈敏的體內或基于細胞的檢測。在大多數IgG上，您可以在短短30分鐘內生成F(ab’)2和Fc/2片段。四川IgGZEROIdeS蛋白酶

對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應用，需要在抗體鉸鏈處進行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細優化，以極大限度地降低多個消化位點的風險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點，可從人 IgG1 生成均質的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結晶和高階結構 （HOS） 的 NMR 研究、結合研究等。在這里，我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化，用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結構域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下特異性受到負面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率，在加入SDS上樣緩沖液之前，停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。云南FabDELLOIdeS蛋白酶抗體酶切用Genovis的GlySERIAS 消化，所有三個連接子區域均被消解。

與IdeS不同，Genovis的GlySERIAS是一種獨特的酶，可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子，例如Gly4Ser和GlyxSery（GS）以及聚甘氨酸（G）接頭。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個結構域，以促進表征并增加對這些分子的理解。融合蛋白的中級分析既可以降低整體樣品的復雜性，又可以對翻譯后修飾進行結構域特異性鑒定和監測。為了改善連接子的去除，Genovis建議使用GlySERIASImmobilized。對于連接子表征，我們推薦GlySERIAS凍干。具有柔性接頭的獨特酶消化融合蛋白；中級方法可降低融合蛋白表征的復雜性；復雜融合蛋白的可靠且可重復的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和絲氨酸殘基的重復序列組成的柔性連接子。該酶在天然反應條件下具有活性，能夠對復雜的融合蛋白進行中級表征。連接子區域同時在多個位點被消化，導致先前連接的組分分離。活性發生在pH7.6下，孵育時間可以根據所需的產物而變化。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的，在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為18kDa。

Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發的目的，并隨時準備使用，只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應用于更高的通量和自動化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時可用的旋轉柱中，這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶，這可能是有利的。 對于更多的制備應用，我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒，這是IgG片段生成和純化的強大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的，F(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內二硫鍵，如果片段想用于結合研究，這一點尤為重要，因為結合效率和免疫反應性將被保留。三個柔性 GS 連接子均被切開，這有助于識別Fc區域的修飾。

樣品制備的條件可能會在樣品中誘發偽影，因此需要避免高溫和堿性pH值進行質譜分析。如果可能的話，避免多個步驟并在一鍋反應中進行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同，為了探索Genovis的GingisREX對離液劑和去液劑的穩定性和耐受性，在一系列試劑中測試了酶活性，并使用底物測定進行了評估。數據顯示，GingisREX在6M時耐受尿素，吐溫高達1%，但活性在0.1%時受到SDC的負面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性，在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應，以同時消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法，其中兩個 scFv 融合，形成一個雙特異性分子，其中一個 scFv 靶向細胞毒性 T 細胞，另一個靶向Ai癥抗原。該蛋白質由四個蛋白質結構域組成，兩個 scFv 均由 VL 和 VH 區域組成，總共由三個柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質的大尺寸（54 kDa）可能對通過完整質譜法進行產品質量監測構成挑戰，因為標準MS儀器可能無法提供蛋白質的單同位素分辨率。FabRICATOR Magic磁珠化IdeS酶切的自動抗體亞基分析可減少操作人員的時間和樣品處理錯誤的風險。江蘇FabDELLOIdeS蛋白酶

可精確定位特定的修飾。而無需肽圖分析，可以較少的手動操作時間快速完成。四川IgGZEROIdeS蛋白酶

蛋白酶用于生成肽，用于質譜分析蛋白質。這些應用包括蛋白質組學和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導的偽影，傳統的蛋白酶并不總是理想的，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質 C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比，所得肽更長，并可能導致序列覆蓋率增加。質譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質量的數據集和避免復雜的數據解釋至關重要。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性，即使在長時間孵育過夜后，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下，證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下，GingisREX未檢測到這種情況。數據證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。四川IgGZEROIdeS蛋白酶