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海南FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學

來源: 發布時間:2024-05-10

與IdeS不同,Genovis的GingisKHAN(Kgp)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在鉸鏈上方的單個位點(KSCDK/THTCPPC)消化人IgG1,產生完整且均質的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點是人IgG1三維結構的結果,使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現額外的消化位點。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性,并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑(2mM半胱氨酸)與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物,研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應,并鑒定翻譯后修飾。GingisKHAN Fab Kit進行人IgG1(如曲妥珠單抗)的消化和抗體片段的后續純化。海南FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學

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在抗體藥物及核酸藥物領域,倍篤生物產品線涵蓋藥物研發的全流程,主要用——RNA轉染試劑、生物活性物質純化分離用填料產品、ADC的payload抗體(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、動物造模用陽性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德國BASF、美國QED、中國君研生物、中國金傳生物、中國毫厘科技、中國再帆生物等。這些國產品牌都具有國內自研、自產能力,批次生產穩定可靠、品質可控,為行業發展提供更多國產選擇。黑龍江IdeS蛋白酶蛋白組學IgMBRAZOR 是IgM 特異性蛋白酶。

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大多數商業zhiliao性抗體屬于IgG類,在Fc結構域中含有N-聚糖。一個重要的關鍵質量屬性是糖基化曲線,因為它會影響穩定性、溶解度、藥效學和藥代動力學特性。這種翻譯后修飾可能發生在生物工藝開發和制造過程中,因此需要密切監測。Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體(mAb)的分析工具。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG,產生F(ab')2和Fc/2片段。單個FabRICATOR消解位點和質量譜的后續精度使Fc糖基化譜能夠檢測,從而可以監測批次間的一致性和其他關鍵質量屬性。

大多數zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架,雙特異性和多特異性形式的開發正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,例如單價結合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化。傳統方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化,這需要優化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性,它在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1,并產生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性,通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實現了完全消化,包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗證了其在生物制藥開發中的用途。Genovis酶的適應于克隆篩選,工藝開發和驗證以及穩定性研究,也適用于受控環境中的批次放行方法。

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樣品制備的條件可能會在樣品中誘發偽影,因此需要避免高溫和堿性pH值進行質譜分析。如果可能的話,避免多個步驟并在一鍋反應中進行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同,為了探索Genovis的GingisREX對離液劑和去液劑的穩定性和耐受性,在一系列試劑中測試了酶活性,并使用底物測定進行了評估。數據顯示,GingisREX在6M時耐受尿素,吐溫高達1%,但活性在0.1%時受到SDC的負面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性,在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述,GingisREX可用于一鍋反應,以同時消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同,雙特異性 T 細胞接合器 (BiTE) 分子是一種融合蛋白療法,其中兩個 scFv 融合,形成一個雙特異性分子,其中一個 scFv 靶向細胞毒性 T 細胞,另一個靶向Ai癥抗原。該蛋白質由四個蛋白質結構域組成,兩個 scFv 均由 VL 和 VH 區域組成,總共由三個柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質的大尺寸(54 kDa)可能對通過完整質譜法進行產品質量監測構成挑戰,因為標準MS儀器可能無法提供蛋白質的單同位素分辨率。Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR(IdeS),為客戶提供了許多選擇,滿足他們的需求。重慶FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學

FabRICATOR是從化膿性鏈球菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達,用于需要高標準和一致性的生物技術應用。海南FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學

與IdeS不同,Genovis的GingisREX(RgpB)是一種精氨酸特異性蛋白酶,可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質,包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化;在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化;產生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶,可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基,包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比,可生成更長的肽,胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質譜進行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇,以實現替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性,通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內具有活性,它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。海南FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學