LC-MS中級分析是一種被大眾接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。它有助于理解多種關鍵質量屬性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端賴氨酸剪切。這種關于翻譯后修飾（PTM）的詳細知識是生物制藥開發和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色譜柱，可快速進行單克隆抗體的柱上酶切，并產生一致的亞基。該色譜柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在鉸鏈下方快速且特異性地消化IgG，產生F（ab'）2和Fc片段，而不會出現任何過度消化的風險。為了減少樣品處理并為樣品制備提供自動化解決方案，FabRICATOR被共價固定在樹脂上，并裝在適用于HPLC的PEEK色譜柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色譜柱，只需稍作修改，即可使用標準HPLC-MS裝置自動生成抗體亞基。然后，FabRICATOR HPLC色譜柱上消解產生的亞基被捕獲在在線連接的反相（RP）色譜柱的柱頭上。FabRICATOR（IdeS蛋白酶）的一大優勢是速度！山東FabULOUSIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個位點（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，產生完整且均質的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點是人IgG1三維結構的結果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現額外的消化位點。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性，并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑（2mM半胱氨酸）與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物，研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應，并鑒定翻譯后修飾。陜西FabRICATOR ZIdeS蛋白酶蛋白組學三個柔性 GS 連接子均被切開，這有助于識別Fc區域的修飾。

作為免疫系統的重要組成部分，IgA在自身免疫性疾病、過敏反應、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發揮作用。在天然條件和復雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫學和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結構差異是鉸鏈區域。與IgA2相比，IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區域，使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在，A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸（P）和纈氨酸（V）之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區域，但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸（R）殘基取代，因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。

與IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一種精氨酸特異性蛋白酶，可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質，包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化；在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；產生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶，可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基，包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比，可生成更長的肽，胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質譜進行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇，以實現替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性，通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內具有活性，它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。孵育時間為過夜（16-18小時），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風險。

與IdeS不同，Genovis的IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性蛋白酶，可在重鏈中CH2結構域下方的一個特定位點消化人IgM，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。該酶能夠對復雜和高分子量的人IgM進行中級分析，從而促進疫苗、zhiliao和診斷等過程中的IgM表征。獨特-可實現IgM的中級表征和質量控制；快速–在30分鐘內生成均勻的F（ab'）2和Fc片段；高度特異性–人IgM重鏈中的一個消化位點。IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性酶，可在重鏈中CH2結構域下方的一個特定位點消化人IgM，產生F（ab'）2和Fc片段。消化在30分鐘內完成，并且由于酶的特異性，如果孵育時間延長，則不存在過度消化的風險。該酶在pH值為5.5至9.0時具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可發揮活性。良好的活性是在37°C下，但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化。IgMBRAZOR在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為38kDa。FabRICATOR（IdeS）酶是生物制藥行業中普遍使用的工具。吉林IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

用于抗體療法（如mAb、ADC和Fc融合蛋白）的表征、質量控制、生產監測。山東FabULOUSIdeS蛋白酶抗體酶切

在Genovis，我們的策略是幫助客戶進行中級（或亞基）分析，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質酶切產品。完整質量和肽圖譜是蛋白質表征的常用方法，我們發現，與簡單但信息有限的完整質量和高度復雜但信息豐富的肽圖譜相比，中級方法具有優勢。通過執行中級描述，您可以生成從完整的質量實驗中獲得的所有信息，具有額外的優勢。在對抗體進行完整質量分析時，很難明確地識別某些修飾。質譜儀器正在改進，可以更有效地分析更大的分子，但通過使用我們的SmartEnzymes，如IdeS，可以將抗體分解成更小的片段，這提高了這些實驗可以執行的分辨率，因此，增加了鑒定修飾的信心。此外，你不僅能夠更好地識別修改，而且你能夠將它們定位到蛋白質上的單個結構域，這是你在完整水平上無法做到的。山東FabULOUSIdeS蛋白酶抗體酶切