與肽圖譜相比，根據(jù)Genovis科學(xué)家的經(jīng)驗，尤其是對于像抗體這樣的分子，許多人在常規(guī)實驗中做了太多的肽圖譜，而中級水平（Middle-level）的方法可以很好地工作。中級方法（IdeS酶切抗體）需要更少的實際操作步驟和較少的示例處理，所有這些都意味著過程中出錯的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺方法，同樣的方法適用于絕大多數(shù)的抗體，這不是肽圖的情況下，可能需要優(yōu)化整個樣品制備，LC分離，質(zhì)譜設(shè)置和數(shù)據(jù)分析的每個不同的抗體分析。這些變化可能是很小的，但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數(shù)據(jù)分析的簡單性，中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。肽圖當(dāng)然可以自動用于樣品制備，但高通量肽圖生成大量數(shù)據(jù)，仍然需要徹底分析。事實上，肽圖譜是一個多步驟的過程，每一個步驟都可能破壞方法，并可能導(dǎo)致破壞蛋白質(zhì)的人工制品，很難交叉訓(xùn)練給非專業(yè)人員。中級水平的方法很容易交叉訓(xùn)練，我們的方法在質(zhì)量控制實驗室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認(rèn)的方法，但一旦完成了這一工作，我相信使用中級分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子，例如 Gly4Ser 和 GlyxSery （GS） 以及聚甘氨酸 （G） 接頭。河北GingisREXIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

當(dāng)你應(yīng)用像肽圖這樣的方法時，你可以從Genovis中級方法中獲得的信息量就沒有那么多了。一個主要的區(qū)別是你不能像在肽水平上那樣將修改定位到單個氨基酸。然而，中級分析比肽圖譜具有快速和簡單的巨大優(yōu)勢，因為需要分析的色譜峰要少得多，數(shù)據(jù)處理任務(wù)要簡單得多。此外，在中級實驗中，手工實驗步驟要少得多，F(xiàn)abALACTICA（IdeS）酶切消化方法不需要針對不同的人體IgG1進(jìn)行優(yōu)化。一旦在氨基酸水平上進(jìn)行了PTM表征，我們非常認(rèn)為中級表征肽圖的一種補(bǔ)充方法，可以在更常規(guī)的基礎(chǔ)上應(yīng)用。中級分析更適用于高通量或監(jiān)測類型的方法，并可用于支持肽圖分析。廣東FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基,生成的片段可用于結(jié)晶和高階（HOS）NMR研究、結(jié)合研究等。

Genovis的FabRICATOR MagIC自動樣品制備可用于分析和監(jiān)測不同的CQA。mAb在生產(chǎn)或儲存過程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個問題，對6種mAb的混合物進(jìn)行強(qiáng)制降解（室溫下3個月），并通過反相LC-MS進(jìn)行分析。當(dāng)在完整水平上分析mAb時，可以檢測到mAb5豐度的顯著差異，同時出現(xiàn)許多新的峰。然而，無法獲得可靠的質(zhì)量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來源在Fab區(qū)域內(nèi)。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過形成氧代內(nèi)酯 （+14 Da） 和二氧代內(nèi)酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來揭示。此外，還可檢測到mAb3輕鏈的異構(gòu)化。該示例說明了FabRICATOR MagIC在mAb中級分析中的強(qiáng)大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無需耗時耗費(fèi)資源的肽圖分析，所有這些都以相對較少的手動操作時間快速完成。

Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發(fā)的目的，并隨時準(zhǔn)備使用，只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應(yīng)用于更高的通量和自動化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時可用的旋轉(zhuǎn)柱中，這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶，這可能是有利的。 對于更多的制備應(yīng)用，我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒，這是IgG片段生成和純化的強(qiáng)大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的，F(xiàn)(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵，如果片段想用于結(jié)合研究，這一點尤為重要，因為結(jié)合效率和免疫反應(yīng)性將被保留。Genovis酶的適應(yīng)于克隆篩選，工藝開發(fā)和驗證以及穩(wěn)定性研究，也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。

Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種獨(dú)特的酶，可在鉸鏈區(qū)域下方的特定位點消化IgG，產(chǎn)生均勻的F（ab'）2和Fc/2片段。除IgG外，沒有其他底物是已知的。IgG在30分鐘內(nèi)消化，如果孵育時間延長，則不存在過度消化的風(fēng)險。由于FabRICATOR在生理反應(yīng)條件下消化IgG，因此保留了免疫反應(yīng)性。在37°C下獲得良好的活性，但也可以在室溫下使用較長的反應(yīng)時間進(jìn)行消解。FabRICATOR可消化人類的所有亞類以及猴子、兔子和綿羊IgG的某些亞類。它對小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-為了消化這些抗體物種，我們建議使用FabRICATORZ。FabRICATOR是從化膿性鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為37725Da。FabRICATOR是IdeS的重組修飾形式，由GenovisAB開發(fā)，用于需要高標(biāo)準(zhǔn)和一致性的生物技術(shù)應(yīng)用。有一種檢測FabRICATOR酶的方法。了解有關(guān)山羊多克隆抗體Anti-FabRICATOR的更多信息。使用GlySERIAS固定化酶和內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR消化度拉糖肽。湖南IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

FabRICATOR MagIC磁珠含有Ides固定化酶專為自動化平臺（振動臺）而設(shè)計。河北GingisREXIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Blinatumomab（一種對 CD19 和 T 細(xì)胞標(biāo)志物 CD3 具有特異性的 BiTE 分子）的研究級生物仿制藥在室溫下用固定化過夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通過LC-MS對消解樣品的直接分析表明，所有三個連接子區(qū)域均被消解，α-CD3 VL和VH鏈洗脫為一個色譜峰，α-CD19 VH和VL鏈作為單獨(dú)的峰洗脫。來自連接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 結(jié)構(gòu)域的小峰顯示該短連接子未完全消化，表明 GlySERIAS 對短連接子的活性較低。與完整的蛋白質(zhì)分析相比，四個結(jié)構(gòu)域的分離提供了具有單同位素分辨率的高質(zhì)量光譜。可以觀察到每個結(jié)構(gòu)域的幾個不同變體，剩余的連接子殘基數(shù)量不同。在色譜分離過程中，α-CD3 VH結(jié)構(gòu)域無法從α-CD19 VH結(jié)構(gòu)域完全基線分離，導(dǎo)致在相關(guān)質(zhì)譜中觀察到一些共洗脫。四個結(jié)構(gòu)域的分離產(chǎn)生了有關(guān)在完整蛋白質(zhì)水平上鑒定的蛋白質(zhì)修飾位置的信息。例如，在完整水平上鑒定的 37 Da 的蛋白質(zhì)修飾被分配給 α-CD3 VH 鏈。此外，240Da 和 320da 的兩個修飾分別被分配給 α-CD3 VL 結(jié)構(gòu)域。后者還含有一個帶有五六個組氨酸殘基的 His 標(biāo)簽。這些數(shù)據(jù)證明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 對包含多個柔性連接子蛋白進(jìn)行質(zhì)量控制的中級工作流程的強(qiáng)大功能。河北GingisREXIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)