與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1,產生完整且均質的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時內完成,并且由于酶的特異性,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風險。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性,不需要還原條件或輔助因子即可發揮活性。活性是在37°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在1000個單位的小瓶中,用于消化1mgIgA1。Genovis提供IdeS蛋白酶色譜柱,使得抗體消化和亞基生成的自動化使生物反應器的在線監測應用成為可能。江西FabRICATORIdeS蛋白酶
對于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說,Fab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰性。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個可觸及的賴氨酸位點消化人IgG1,在足夠溫和的還原條件下保留鏈內和鏈間二硫鍵,從而產生完整的Fab和Fc片段。對于融合蛋白,消化通常在鉸鏈上方獲得,但融合伴侶的結構和氨基酸序列可能導致其他暴露的消化位點。如果去除保守的 Fc N-聚糖,Fc 中的第二個切割位點也可能被GingisKHAN酶切。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時,并通過 HPLC 進行分析。河南GlycINATORIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶Genovis的GingisKHAN 可以消化單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白。
LC-MS中級分析是一種被大眾接受的分析方法,用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。它有助于理解多種關鍵質量屬性 (CQA),例如糖基化、氧化和 C 端賴氨酸剪切。這種關于翻譯后修飾(PTM)的詳細知識是生物制藥開發和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色譜柱,可快速進行單克隆抗體的柱上酶切,并產生一致的亞基。該色譜柱含有固定化的FabRICATOR(IdeS)酶,可在鉸鏈下方快速且特異性地消化IgG,產生F(ab')2和Fc片段,而不會出現任何過度消化的風險。為了減少樣品處理并為樣品制備提供自動化解決方案,FabRICATOR被共價固定在樹脂上,并裝在適用于HPLC的PEEK色譜柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色譜柱,只需稍作修改,即可使用標準HPLC-MS裝置自動生成抗體亞基。然后,FabRICATOR HPLC色譜柱上消解產生的亞基被捕獲在在線連接的反相(RP)色譜柱的柱頭上。
不同于IdeS,Genovis的FabDELLO 是一種蛋白酶,可在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1,在兩小時內產生完整的 Fab 和 Fc 片段,無需還原條件。該酶對具有突變鉸鏈區域的抗體(如 LALA 突變)具有活性,并啟用中級 LC-MS 來表征具有突變鉸鏈的抗體的關鍵質量屬性。FabDELLO 在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1 (...KSCDK / THTCPPCP...),生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單個消化位點是人 IgG1 的三維結構的結果,使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現額外的消化位點。FabDELLO在天然條件下具有活性,需要鈣離子的存在。在37°C和pH 7-8.5下獲得良好活性。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 32 kDa。三個柔性 GS 連接子均被切開,這有助于識別Fc區域的修飾。
Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一種獨特的酶,可在鉸鏈區域下方的特定位點消化IgG,產生均勻的F(ab')2和Fc/2片段。除IgG外,沒有其他底物是已知的。IgG在30分鐘內消化,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風險。由于FabRICATOR在生理反應條件下消化IgG,因此保留了免疫反應性。在37°C下獲得良好的活性,但也可以在室溫下使用較長的反應時間進行消解。FabRICATOR可消化人類的所有亞類以及猴子、兔子和綿羊IgG的某些亞類。它對小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-為了消化這些抗體物種,我們建議使用FabRICATORZ。FabRICATOR是從化膿性鏈球菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為37725Da。FabRICATOR是IdeS的重組修飾形式,由GenovisAB開發,用于需要高標準和一致性的生物技術應用。有一種檢測FabRICATOR酶的方法。了解有關山羊多克隆抗體Anti-FabRICATOR的更多信息。GlySERIAS酶能夠分離多功能融合蛋白的各個結構域,以促進表征并增加對這些分子的理解。黑龍江GlycINATORIdeS蛋白酶
Genovis已經測試了 PBS 和 150 mM 醋酸銨,并且也適用于FabRICATOR HPLC。江西FabRICATORIdeS蛋白酶
作為免疫系統的重要組成部分,IgA在自身免疫性疾病、過敏反應、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發揮作用。在天然條件和復雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫學和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結構差異是鉸鏈區域。與IgA2相比,IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區域,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。江西FabRICATORIdeS蛋白酶