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福建用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

來源: 發布時間:2024-06-18

Genovis 集團由瑞典 Genovis AB 和美國全資子公司 Genovis Inc. 組成。該公司的在納斯達克北方增長市場上市。如需了解更多信息,請訪問投資者關系。 Genovis的經營理念是為生物制藥和研究行業的客戶提供工具,以促進和節省開發新治療方法和診斷的時間。Genovis 酶產品,稱為 SmartEnzymes,被世界各地的科學家使用,創新的產品形式促進了生物藥物的開發和質量控制。 通過在2020年收購QED Bioscience,產品組合已擴大到包括用于研究、生物藥物開發和診斷檢測的抗體和試劑。在 網站 上閱讀有關QED的更多信息 Genovis 研發活動的基石是客戶關系,使產品開發能夠滿足客戶需求。與專注于表征新酶、開發新工作流程和新靶點抗體的學術團體的合作同樣有價值。生物制劑的表征和質量控制過程中確定電荷變體;福建用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

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我們展示了使用兩種蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一種 Fc 融合蛋白,含有 TNFα 受體的胞外結構域。該結構域用 2 個 N-糖和 8-11 個 1 個具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修飾。在 37°C 下將這種重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時,可完全去除所有 N-和 O-糖,如中級 LC-MS 分析所示。促紅xibao生成素 (EPO) 是一種攜帶 3 個 N-聚糖和 1 個he心 1 個 O-聚糖的小蛋白質,其總質量的近 40% 由聚糖組成。O-連接聚糖通常存在于蛋白質的暴露位置,因為它們在蛋白質折疊發生后附著。只有負責其合成的糖基轉移酶才能接觸到這些暴露的位點。天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶SialEXO 2-3,裝在500個單位的小瓶中,用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。

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Genovis的ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖:依那西普是一種融合蛋白,由TNF受體的胞外結構域與人IgG1的Fc部分相連。該蛋白質在Fc區域上方含有多達13個O-糖基化的Ser/Thr殘基簇,使其成為一種非常難以在結構上表征的生物制藥。為了證明ImpaRATOR的聚糖特異性,制備了三種具有不同聚糖組成的依那西普樣品:(i)攜帶單唾液酸和二唾液酸化he心1結構混合物的未經處理的糖蛋白,(ii)用SialEXO處理的糖蛋白去除唾液酸并產生裸核1結構,以及(iii)用SialEXO和GalactEXO處理的糖蛋白產生單個GalNAc殘基, 也稱為Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一鍋反應中處理三個樣品(圖1)。作為比較,SialEXO處理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR處理。將所得肽還原、烷基化并用HILIC-MS進行分析。FabRICATOR被包括在反應中,以將Fc區與大多數C端糖肽分離,以促進其表征。

C1抑制劑的去糖基化:在O-糖基化生物制藥的生產過程中,由于he心GalNAc殘基的加工不完全,可能會出現Tn抗原。這表現為具有 203 Da HexNAc 單位差異的重復質量位移。為了確認 Tn 抗原的存在,可以應用以下工作流程,此處在重度(26 個位點)O-糖基化 C1 抑制劑上演示。首先,使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖,使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能測試?:依那西普是另一種具有挑戰性的生物制藥模型分子,攜帶 13 個 O-聚糖位點,其中平均 9 至 10 個位點被占用。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強相互作用。

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使用Genovis的GalNAcEXO 對 O-糖基化生物制藥進行 Tn 抗原表征:未成熟的截短O-聚糖導致了復雜生物制藥的異質性,使其分析更具挑戰性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc殘基組成,通過糖苷鍵與絲氨酸或蘇氨酸連接,稱為Tn抗原。 現在,使用GalNAcEXO可以采用合適的酶策略來去除這些GalNAc并簡化生物制藥的表征。在質譜圖中可以觀察到重復峰的模式。其次,在與GalNAcEXO酶孵育后,剩余的GalNAc殘基被完全去除,留下一個峰。因此,該工作流程確認了 O-糖基化生物制藥上存在 Tn 抗原,并允許定量he心 GalNAc 水平。這種工作流程的另一個好處是減少了剩余的異質性,這有助于確認蛋白質的完整質量,并揭示截短的片段。親和純化微離心柱,SialEXO 凍干 200 單位,OpeRATOR 凍干 200 單位。湖北凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

GlycOCATCH的應用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學、復雜樣品的研究和生物制藥的表征。福建用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

上海倍篤生物科技有限公司(簡稱“倍篤生物”),由中國科學院及生物醫藥產業界人士,于2018年1月共同創立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材(如Genovis的IdeS酶),遵守相關法規要求,如cGMP規范、ISO13485質量管理體系認證等,致力于為診斷領域如分子診斷及病原微生物檢測研發等,藥物研發領域如細胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細胞及外泌體研究等客戶提供合規、高質量物料及專業服務,以期與客戶共同協作,加快研發及生產進度,為客戶提供更多價值。福建用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究