樣品制備的條件可能會在樣品中誘發偽影，因此需要避免高溫和堿性pH值進行質譜分析。如果可能的話，避免多個步驟并在一鍋反應中進行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同，為了探索Genovis的GingisREX對離液劑和去液劑的穩定性和耐受性，在一系列試劑中測試了酶活性，并使用底物測定進行了評估。數據顯示，GingisREX在6M時耐受尿素，吐溫高達1%，但活性在0.1%時受到SDC的負面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性，在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應，以同時消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法，其中兩個 scFv 融合，形成一個雙特異性分子，其中一個 scFv 靶向細胞毒性 T 細胞，另一個靶向Ai癥抗原。該蛋白質由四個蛋白質結構域組成，兩個 scFv 均由 VL 和 VH 區域組成，總共由三個柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質的大尺寸（54 kDa）可能對通過完整質譜法進行產品質量監測構成挑戰，因為標準MS儀器可能無法提供蛋白質的單同位素分辨率。IgMBRAZOR酶能夠對復雜和高分子量的人 IgM 進行中級分析，從而促進疫苗診斷等過程中的IgM表征和質量控制。安徽FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切

與IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一種精氨酸特異性蛋白酶，可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質，包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化；在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；產生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶，可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基，包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比，可生成更長的肽，胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質譜進行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇，以實現替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性，通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內具有活性，它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。山西IgGZEROIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶用 Genovis的GlySERIAS Immobilized消化Romiplostim，產生均質的 Fc/2。

與IdeS不同，在蛋白質zhiliao藥物的質量控制過程中，詳細分析和識別質量屬性非常重要。對于具有柔性連接子的融合蛋白療法，這包括確認連接蛋白的質量以及蛋白質接頭的質量。使用 Genovis的GlySERIAS 的連接子酶切可以通過分離連接的蛋白質結構域來幫助這種質量控制。然而，連接子中的大量甘氨酸殘基提供了酶的許多潛在消化位點，導致連接子內多個位點同時水解。消化的產物通常由連接蛋白的幾種變體組成，并保留不同程度的連接子。雖然觀察到的異質性通常不會對蛋白質亞基的詳細表征產生負面影響，但有助于直接表征連接子，但有時需要更均勻的消化產物來詳細分析單個蛋白質結構域。

作為免疫系統的重要組成部分，IgA在自身免疫性疾病、過敏反應、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發揮作用。在天然條件和復雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫學和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結構差異是鉸鏈區域。與IgA2相比，IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區域，使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在，A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸（P）和纈氨酸（V）之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區域，但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸（R）殘基取代，因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。幾乎完全消化了Fc結構域中的連接子，留下了接近均質的Fc/2產物。

不同于IdeS，Genovis的FabDELLO 是一種蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1，在兩小時內產生完整的 Fab 和 Fc 片段，無需還原條件。該酶對具有突變鉸鏈區域的抗體（如 LALA 突變）具有活性，并啟用中級 LC-MS 來表征具有突變鉸鏈的抗體的關鍵質量屬性。FabDELLO 在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1 （...KSCDK / THTCPPCP...），生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單個消化位點是人 IgG1 的三維結構的結果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現額外的消化位點。FabDELLO在天然條件下具有活性，需要鈣離子的存在。在37°C和pH 7-8.5下獲得良好活性。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽，分子量為 32 kDa。孵育時間為過夜（16-18小時），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風險。重慶IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切

例如氧化、糖基化等翻譯后修飾，可以用IdeS酶。安徽FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切

Genovis提供色譜柱形式的FabRICATOR（IdeS）酶，是在鉸鏈下方對IgG進行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。酶解后，可以使用反相HPLC、質譜或其他分析方法分析片段。抗體消化和亞基生成的自動化使生物反應器的在線監測應用成為可能，例如，作為2D-LC-MS設置的一部分，將反應器直接耦合到MS。這種自動化的抗體亞基分析方法減少了操作人員的時間、樣品處理時間并提高了通量。安徽FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切