對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應用,需要在抗體鉸鏈處進行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統酶可用于生成 Fab 片段,但非特異性酶活性需要仔細優化,以極大限度地降低多個消化位點的風險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點,可從人 IgG1 生成均質的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結晶和高階結構 (HOS) 的 NMR 研究、結合研究等。在這里,我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化,用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結構域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊,因此在變性條件下特異性受到負面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率,在加入SDS上樣緩沖液之前,停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。可消化精氨酸殘基的 C 末端蛋白質,包括難以與其他酶消化的 Arg-Pro 鍵。陜西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶
Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)與IdeS酶一樣是特異性蛋白酶。在二維核磁共振波譜 (2D-NMR) 之后,可以通過 HOS 分析在精確的原子水平上評估 mAb 的關鍵質量屬性。從Genovis的FabALACTICA Immobilized獲得均相Fab和Fc片段的工作流程,是評估嵌合單克隆抗體英夫利昔單抗中HOS的理想選擇,在海報“FabALACTICA產生純和均相的mAb亞基,促進2D-NMR波譜分析”中進行了描述。來自生成的 Fab 和 Fc 片段的高質量信號和光譜分辨率導致能夠觀察 Fab 和 Fc 之間的結構變化、氧化和非氧化樣品之間的差異,并通過觀察原子分辨率來比較原研劑和生物仿制藥的 HOS。上海GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學可在重鏈中 CH2 結構域下方的一個特定位點消化人 IgM,產生均質的 F(ab')2 和 Fc 片段。
作為免疫系統的重要組成部分,IgA在自身免疫性疾病、過敏反應、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發揮作用。在天然條件和復雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫學和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結構差異是鉸鏈區域。與IgA2相比,IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區域,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。
與IdeS不同,Romiplostim 由四個相同的血小板生成素 (TPO) 受體結合肽和一個 Fc 片段組成,通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似,用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜,或用 GlySERIAS 凍干 1 小時并在 37°C 下過夜消化該蛋白質。 鏈間二硫鍵被還原,以便于通過反相LC-MS進行以下分析。與度拉糖肽的觀察結果類似,用固定化酶消化產生均質的 Fc/2,剩下一個連接子殘基,此處為甘氨酸殘基。這有助于識別專門位于Fc區域的修改。用凍干酶消化 1 小時得到 Fc/2,剩余 4 個甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個 TPO 肽連接。另一方面,這使得研究 Fc/2 和第yi個肽之間的連接區域成為可能,而不會受到第二個肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產生 2 個 Fc/2 變體,分別剩下 4 個和 1 個甘氨酸殘基。根據消化時間的不同,使用凍干產物釋放的肽以五或七種變體存在,接頭中殘留的甘氨酸殘基數量不同,而使用固定化產物釋放的肽以四種變體存在。Genovis的FabRICATOR MagIC適用于自動化平臺。
Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS)試劑盒可消化兔 IgG,但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段,您需要另一種填料,而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對處理兔IgG感興趣,請聯系Genovis團隊,我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡單性、速度和可重復性也意味著這種酶可以被用于質量控制應用。 QC方法需要執行簡單,易于訓練,高度可重復,數據易于分析,這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因為它適用于一系列不同的IgG,這也意味著使用FabRICATOR進行QC工作的客戶將能夠在未來的產品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。Genovis的IdeS蛋白酶是IgG特異性半胱氨酸蛋白酶。河南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗體酶切
降低樣品處理錯誤的風險,同時提高通量。陜西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶
與IdeS不同,Genovis的FabULOUS(SpeB)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在來自多個不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區域消化,產生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化,產生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點是......KTHT...例如,制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結構研究。對來自多個物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區域的消化物;快速-在一小時內生成Fab和Fc片段;有效消化小鼠IgG1。FabULOUS來源于化膿性鏈球菌,在大腸桿菌中表達。FabULOUS的分子量為29kDa,該酶含有His標簽。陜西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶