α連接的Genovis的GalNAcs的水解:GalNAcEXO 是一種 α-N-乙酰半乳糖胺苷酶,可有效水解糖蛋白上的末端 GalNAc 殘基。與絲氨酸或蘇氨酸連接的 GalNAc(稱為 Tn 抗原)被 GalNAcEXO 快速有效地水解,并且該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAcs 上顯示出活性。Genovis的GalNAcEXO 是一種外α-N-乙酰半乳糖胺酶,用于有效水解與糖蛋白(Tn 抗原)中的絲氨酸或蘇氨酸殘基相連的 α-N-乙酰半乳糖胺 (GalNAc)。該酶還在 α1-3 連接的末端 GalNAc 上顯示活性。GalNAcEXO 在天然條件下水解糖蛋白上的 GalNAc,在 pH 值 6.0 至 7.6 范圍內具有高度活性。用SialEXO處理血清,上樣于GlycOCATCH,洗滌,洗脫O-糖基化蛋白。Swiss Prot 數據庫鑒定蛋白質列表。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶
GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率; 3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!將混合物加載到GlycOCATCH上,洗滌樹脂,并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后,在RP-LC-MS上分離樣品。數據顯示,糖苷酸肽的選擇性純化,攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集:IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區域。胰蛋白酶消化IgA后,將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上,并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集,具有不同程度的糖基化。廣東PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成,每種唾液酸酶都具有獨特的活性,并且它們同時起作用。
與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖:糖基化往往是異質的,這使得對高度糖基化的生物zhiliao藥物的分析具有挑戰性。完整質量數的確認以及其他產品質量屬性的表征受到不同糖型復雜性的阻礙,這就是為什么有效的聚糖去除工具簡化了此類分析的原因。 雖然 N-聚糖包含一個共同的結構,并且可以通過 PNGase F 整體去除,但粘蛋白型 O-聚糖在結構上更加多樣化,具有多個不同的he心。OmniGLYZOR含有固定化酶的混合物,能夠依次分解O-聚糖,以完全去除最常見的O-聚糖結構(二唾液酸和單唾液酸基he心1和Tn抗原)。
Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協同的作用:O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區域O-聚糖位點的覆蓋率(圖3)。使用OpeRATOR鑒定對應于所有13個O-聚糖位點的肽,而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個位點。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR (1) 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好,此處由 S186 和 T245 位點缺乏消化來表明。此外,ImpaRATOR 在兩個相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解,如 S213 位點酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點酶解肽的低強度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品(T184-S199和T200-H204;圖2b和d),而在ImpaRATOR消化的樣品中,具有漏裂的相應肽(S184-H204)的強度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點覆蓋率,但使用ImpaRATOR進行消化可以表征O-聚糖結構,包括唾液酸化物種。例如,條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應該與使用OpeRATOR的消化進行比較,在OpeRATOR中,必須去除唾液酸才能產生酶活性,這意味著有關唾液酸化的信息丟失。總而言之,ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關聚糖組成和 O-聚糖位點的完整信息。OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。
Genvois的SialEXO產品是唾液酸酶,用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成,每種唾液酸酶都具有獨特的活性,并且它們同時起作用。一種酶對α2-3、α2-6和α2-8連接的唾液酸具有很好的活性,另一種酶(SialEXO 2-3)通過α2-3-鍵快速水解唾液酸。SialEXO凍干可在2小時內去除天然蛋白質上的所有唾液酸。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白,在pH值范圍為6.5至9時顯示出活性。這些酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。兩種酶都含有 His 標簽,酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。 兩種酶都含有 His 標簽,酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶
用于糖蛋白的去氟糖基化,而不會用酶污染z終制劑。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶
genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖:為了確認依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數據,進行了釋放的N-聚糖分析。標記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失,如半乳糖基化聚糖物種的信號丟失所示。該酶是一種有價值的工具,可降低樣品異質性,用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc;2. 實現完全糖基去除,以改善蛋白質表征;3. 可固定在即用型離心柱中。福建固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶