糖蛋白性能測試：O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成，例如血型抗原和劉易斯結構。分析用這種復雜的聚糖結構修飾的糖蛋白可能具有挑戰性，需要高效和特異性的酶工具。我們在許多糖基工程TNFR蛋白上測試了Genovis的FucosEXO，這些蛋白攜帶多達11個O-聚糖，這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時內對所有三種 TNFR 蛋白進行去巖藻糖磺酸處理，而用其他巖藻糖酶處理導致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO對α1-6連接的巖藻糖殘基沒有活性。海南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶

GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成，均帶有His標簽，組分的分子量為87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的凍干酶。Genovis的GalactEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 單位小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-連接的半乳糖。1. 用于方法開發的靈活格式；2. 可以結合酶以提高效率； 3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！將混合物加載到GlycOCATCH上，洗滌樹脂，并用8M尿素洗脫結合的肽。純化后，在RP-LC-MS上分離樣品。數據顯示，糖苷酸肽的選擇性純化，攜帶he心1-O-聚糖。IgA 特異性 O-糖肽富集：IgA 抗體包含 N-連接的糖基化和重度 O-糖基化的鉸鏈區域。胰蛋白酶消化IgA后，將肽和genovis 的SialEXO的混合物加載到GlycOCATCH樹脂上，并用PBS和離心洗滌。用 8 M 尿素洗脫顯示預期的 O-糖基化鉸鏈肽富集，具有不同程度的糖基化。重慶凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中。

SialEXO 2-3 在天然條件下水解糖蛋白，在 pH 值范圍為 7.0 至 9.0 時顯示出活性。該酶來源于Akkermansia muciniphila，并在大腸桿菌中表達。該酶具有 His 標簽，分子量為 66 kDa。1. 用于方法開發的靈活格式；2. 可以結合酶以提高用于離心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的SialEXO酶，用于糖蛋白的去唾液酸化，而不會被酶污染z終制劑。它水解天然糖蛋白上的唾液酸（α2-3、α2-6 和 α2-8）并釋放出聚糖。效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應條件在一小時內有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當加入RapiGest?并在變性條件下進行反應時，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內完全去除，PNGase F固定化15分鐘內完全去除。在變性反應條件下，PNGase F 在 30 分鐘內成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應條件，將常用的糖蛋白標準品RNase B在10或15分鐘內完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。PNGase F 以凍干粉的形式提供，裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中，分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。

在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截斷O-聚糖后，在質譜圖中觀察到幾個與GalNAcs相關的峰。為了去除剩余的GalNAc殘基，應用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO處理后觀察到的單個蛋白峰顯示完全去除剩余的GalNAcs。?GalNAcEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性，使其與大多數樣品相容。此外，GalNAcEXO的活性不依賴于任何可能影響LC-MS分析的輔因子，如BSA。根據底物的性質，糖蛋白的GalNAcEXO反應在2小時內完成，而更復雜的樣品可能需要孵育過夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在離心柱中，以便快速方便地處理樣品，在制備過程中不會殘留酶。使用FabRICATOR?將曲妥珠單抗消化成亞基，并使用LC-MS進行分析。四川凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物可快速有效地去除抗體、融合蛋白；海南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶

用于水解離心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的 PNGase F 酶，用于在樣品中酶峰減少的糖蛋白上水解 N-糖。 將糖蛋白樣品與PNGase F一起在離心柱中固定，然后通過離心步驟輕松收集去糖基化的蛋白質。由于空間位阻，PNGase F對某些糖蛋白的活性可能緩慢或受到抑制 - 在這些情況下可能需要更長的孵育時間或糖蛋白變性。 Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3.z終樣品中的酶峰減少。海南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶