Genovis的PNGase F 是一種糖酰胺酶,可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動物天冬酰胺連接復合物、雜交體或高甘露糖寡糖的內層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。 在反應過程中,從中去除聚糖的天冬酰胺殘基被脫酰胺為天冬氨酸。釋放的低聚糖完好無損,可用于進一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的樣品制備,以降低蛋白質的異質性,使游離的糖分析成為可能,并研究N-糖的功能作用。 該酶在大腸桿菌中表達,該重組基因來源于伊麗莎白金氏腦膜敗血癥。 評價抗體片段對完整蛋白聚集的影響。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生產。 mAb1被糖基化,主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦雙觸角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖。山東PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
Genovis的ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖:依那西普是一種融合蛋白,由TNF受體的胞外結構域與人IgG1的Fc部分相連。該蛋白質在Fc區域上方含有多達13個O-糖基化的Ser/Thr殘基簇,使其成為一種非常難以在結構上表征的生物制藥。為了證明ImpaRATOR的聚糖特異性,制備了三種具有不同聚糖組成的依那西普樣品:(i)攜帶單唾液酸和二唾液酸化he心1結構混合物的未經處理的糖蛋白,(ii)用SialEXO處理的糖蛋白去除唾液酸并產生裸核1結構,以及(iii)用SialEXO和GalactEXO處理的糖蛋白產生單個GalNAc殘基, 也稱為Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一鍋反應中處理三個樣品(圖1)。作為比較,SialEXO處理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR處理。將所得肽還原、烷基化并用HILIC-MS進行分析。FabRICATOR被包括在反應中,以將Fc區與大多數C端糖肽分離,以促進其表征。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶而用其他巖藻糖酶處理部分去除巖藻糖或根本沒有去除。
上海倍篤生物科技有限公司(簡稱“倍篤生物”),由中國科學院及生物醫藥產業界人士,于2018年1月共同創立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材(如Genovis的IdeS酶),遵守相關法規要求,如cGMP規范、ISO13485質量管理體系認證等,致力于為診斷領域如分子診斷及病原微生物檢測研發等,藥物研發領域如細胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細胞及外泌體研究等客戶提供合規、高質量物料及專業服務,以期與客戶共同協作,加快研發及生產進度,為客戶提供更多價值。
與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗體、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和簡單的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于減少異質性,以促進蛋白質的分析,例如質譜法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-連接聚糖的快速高效去糖基化;即用型離心柱形式 - 無酶干擾分析;與LC-MS兼容。與PNGase F類似,Genvois的與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常見的粘蛋白型 O-糖所需的酶,即單唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 (α-GalNAc)。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下組分:PNGase?F;O-糖苷酶。OmniGLYZOR特點:與LC-MS兼容;完全去除聚糖,改進蛋白的分析;
與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括:OmniGlyZOR 微離心柱;PNGase F 凍干;RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性,否則某些 N-糖基化位點很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對EPO進行O-糖位點特異性消化:對于jin攜帶一個或幾個 O-糖基化位點的簡單底物蛋白,OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點。 使用游離聚糖方法分析zhiliao性抗體曲妥珠單抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。福建凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶
固定形式可提高酶與底物的比率,快速去糖基化。山東PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
genovis的FucosEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性,使其與大多數樣品相容。此外,FucosEXO活性不依賴于任何可能影響LC-MS分析的輔因子,如BSA。根據底物的性質,FucosEXO 可在 1 至 2 小時內水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 連接的巖藻糖殘基,而對于非常復雜的樣品可能需要更長的孵育時間。FucoseEXO也可固定在離心柱中,可快速方便地處理高達0.5mg的糖蛋白。使用離心柱形式,將糖蛋白樣品與固定化的FucosEXO樹脂一起孵育,然后在離心步驟中輕松收集消化的糖蛋白。山東PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis