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固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

來源: 發布時間:2024-08-12

Genovis的SialEXO Immobilized是一種微離心柱,用于在室溫下孵育30分鐘后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。為了研究依那西普的潛在電荷變體,開發了一種使用SialEXO固定化柱對糖蛋白進行去唾液酸化的一般工作流程。毛細管電泳通常用于在生物制劑的表征和質量控制過程中確定電荷變體。使用SialEXO Imfixedized對糖蛋白進行去唾液酸化,并使用ProteinSimple的Maurice在成像等電聚焦中進行分析。綜合起來,該分析工作流程改進了糖蛋白的分離并實現了電荷異構體分析。依那西普,如果不首先去除唾液酸,將很難分析,但使用SialEXO固定化分離峰可以獲得。ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖結構表征。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

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GlycOCATCH?親和純化:用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽親和純化的富集樹脂。GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供。該產品包含:4 個 GlycOCATCH 親和純化微離心柱,每個柱能夠結合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白(總共 200 μg)。Genovis的SialEXO 凍干 200 單位,用于去除唾液酸;OpeRATOR 凍干 200 單位,用于結合的 O-糖蛋白的可選洗脫方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集;2. 復雜樣品的特異性凈化;3. 用于改進 MS 分析的樣品制備。O-糖基化蛋白和肽的特異性富集:O-連接聚糖參與多種生物過程,包括抑制病原體引起的gan染、炎癥反應、造血和細胞信號傳導。甘肅用于自動化系統的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。

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與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗體、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和簡單的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于減少異質性,以促進蛋白質的分析,例如質譜法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-連接聚糖的快速高效去糖基化;即用型離心柱形式 - 無酶干擾分析;與LC-MS兼容。與PNGase F類似,Genvois的與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常見的粘蛋白型 O-糖所需的酶,即單唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 (α-GalNAc)。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下組分:PNGase?F;O-糖苷酶。

genvois的OpeRATOR 是一種內切蛋白酶,可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽鍵的水解。內切蛋白酶具有高特異性,可消化絲氨酸或蘇氨酸殘基的O-聚糖N端的蛋白質。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖,并且該酶不會用 N-連接聚糖消化糖蛋白。該酶對具有亞洲化he心1 O-聚糖的位點z活躍。它還消化唾液酸化的he心 1 和he心 3,但程度要低得多。為了獲得z佳性能,需要去除唾液酸,因此,SialEXO凍干(唾液酸酶混合物)包含在購買中。 曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數據,進行了釋放的N-聚糖分析。

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Genovis的SialEXO產品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。這些酶對天然糖蛋白或游離的聚糖結構上存在的 N- 和 O-連接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前預處理O-糖基化蛋白。其他應用包括降低樣品復雜性、電荷異構體分析和外切糖苷酶陣列。N-連接、O-連接和游離聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸,增強對蛋白質電荷變體的分析可固定在即用型離心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白,并通過中級質譜分析。我們將該工作流程應用于依那西普的分析,雖然未經處理的TNFR結構域過于復雜而無法分析,但O-聚糖組成可以在用PNGase F處理后進行分離和比較。OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物可快速有效地去除抗體、融合蛋白;山西凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

OpeRATOR用于質譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析,消化發生在O-糖基化位點的N端。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究

GlycOCATCH設計用于特異性結合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹脂基于無活性的Genovis的OpeRATOR酶,該酶經過工程設計,可以高親和力結合O-糖基化蛋白和肽。 結合在pH 5-8的生理緩沖液中進行。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強相互作用,可以用8M尿素進行洗脫?;蛘?,可以使用活性OpeRATOR酶進行洗脫,該酶消化O-聚糖位點的N末端結合的O-糖蛋白。在后一種情況下,肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購買中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹脂結合效率更高,因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購買中。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質組學研究