在Genovis，我們的策略是幫助客戶進(jìn)行中級(jí)（或亞基）分析，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品。完整質(zhì)量和肽圖譜是蛋白質(zhì)表征的常用方法，我們發(fā)現(xiàn)，與簡單但信息有限的完整質(zhì)量和高度復(fù)雜但信息豐富的肽圖譜相比，中級(jí)方法具有優(yōu)勢。通過執(zhí)行中級(jí)描述，您可以生成從完整的質(zhì)量實(shí)驗(yàn)中獲得的所有信息，具有額外的優(yōu)勢。在對(duì)抗體進(jìn)行完整質(zhì)量分析時(shí)，很難明確地識(shí)別某些修飾。質(zhì)譜儀器正在改進(jìn)，可以更有效地分析更大的分子，但通過使用我們的SmartEnzymes，如IdeS，可以將抗體分解成更小的片段，這提高了這些實(shí)驗(yàn)可以執(zhí)行的分辨率，因此，增加了鑒定修飾的信心。此外，你不僅能夠更好地識(shí)別修改，而且你能夠?qū)⑺鼈兌ㄎ坏降鞍踪|(zhì)上的單個(gè)結(jié)構(gòu)域，這是你在完整水平上無法做到的。Genovis的FabDELLO可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人 IgG1，在兩小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段。青海GlySERIASIdeS蛋白酶

抗體 Fc 糖基化譜是一種重要的 CQA，因?yàn)樗鼤?huì)影響療效、和免疫原性。因此，需要從早期開發(fā)、工藝開發(fā)到質(zhì)量控制和批量放行的整個(gè)過程對(duì)Fc聚糖譜進(jìn)行監(jiān)測。傳統(tǒng)的分析方法基于對(duì)游離的聚糖進(jìn)行熒光標(biāo)記，然后通過HILIC-HPLC或CE進(jìn)行分析，這需要多步驟的樣品制備方案，這需要大量的時(shí)間和資源。使用Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb，然后使用LC-MS進(jìn)行中級(jí)分析，為Fc聚糖分析提供了一種快速、直接的替代方法。如上所示，它很容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，以提高通量并降低處理錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)。青海GlySERIASIdeS蛋白酶Genovis的FabDELLO作用于人 IgG1 鉸鏈上方的單個(gè)暴露賴氨酸殘基。

Genovis酶的適應(yīng)性和更高的通量和自動(dòng)化工作流程的中級(jí)方法，這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進(jìn)，在表征實(shí)驗(yàn)室中有更大的能力進(jìn)行更多類型的分析，或者在工藝開發(fā)或QC實(shí)驗(yàn)室中有更先進(jìn)的分析儀器。 當(dāng)涉及到能夠支持大量樣本分析的活動(dòng)時(shí)，例如克隆篩選，工藝開發(fā)和驗(yàn)證以及穩(wěn)定性研究，這是非常好的。 此外，Genovis產(chǎn)品的效率、健壯性（Robust）和易用性使它們更容易應(yīng)用于這些類型的工作，而且，也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。Genovis的產(chǎn)品很好地支持這種類型的工作，這也促使Genovis不斷推出新產(chǎn)品和現(xiàn)有產(chǎn)品的不同形式，以支持客戶的工作。

用于IgA1和IgA2m1以上鉸鏈消化的凍干酶。與IdeS不同，Genovis提供的IgASAPSub1+2在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1和IgA2m1，產(chǎn)生完整且均勻的Fab和Fc片段。由于人IgA1的鉸鏈比IgA2的鉸鏈長，因此IgA1和IgA2m1之間來自消化位點(diǎn)的氨基酸C末端不同。IgASAPSub1+2可消化分泌物和血清IgA。孵育時(shí)間為過夜（16-18小時(shí)），并且由于酶的特異性，沒有過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。該酶在pH值為6.0至8.0時(shí)具有活性，不需要還原條件或輔助因子即可產(chǎn)生活性。活性為37°C。IgASAPSub1+2是從丹毒梭菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為131kDa。IgASAPSub1+2凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在1000個(gè)單位的小瓶中，用于消化1mgIgA1和IgA2m1。消化在1小時(shí)內(nèi)完成，且具有特異性。即使孵育時(shí)間延長，也沒有過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。

與IdeS不同，Genovis的FabULOUS（SpeB）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在來自多個(gè)不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區(qū)域消化，產(chǎn)生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化，產(chǎn)生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點(diǎn)是......KTHT...例如，制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。對(duì)來自多個(gè)物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區(qū)域的消化物；快速-在一小時(shí)內(nèi)生成Fab和Fc片段；有效消化小鼠IgG1。FabULOUS來源于化膿性鏈球菌，在大腸桿菌中表達(dá)。FabULOUS的分子量為29kDa，該酶含有His標(biāo)簽。Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS蛋白酶）試劑盒可消化兔 IgG。青海GlySERIASIdeS蛋白酶

Genovis的FabRICATOR （IdeS蛋白酶）在30分鐘內(nèi)消化IgG，如果孵育時(shí)間延長，則不存在過度消化的風(fēng)險(xiǎn)。青海GlySERIASIdeS蛋白酶

Genovis的FabRICATOR MagIC自動(dòng)樣品制備可用于分析和監(jiān)測不同的CQA。mAb在生產(chǎn)或儲(chǔ)存過程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會(huì)影響zhiliao產(chǎn)品的質(zhì)量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個(gè)問題，對(duì)6種mAb的混合物進(jìn)行強(qiáng)制降解（室溫下3個(gè)月），并通過反相LC-MS進(jìn)行分析。當(dāng)在完整水平上分析mAb時(shí)，可以檢測到mAb5豐度的顯著差異，同時(shí)出現(xiàn)許多新的峰。然而，無法獲得可靠的質(zhì)量數(shù)據(jù)。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來源在Fab區(qū)域內(nèi)。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識(shí)別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過形成氧代內(nèi)酯 （+14 Da） 和二氧代內(nèi)酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來揭示。此外，還可檢測到mAb3輕鏈的異構(gòu)化。該示例說明了FabRICATOR MagIC在mAb中級(jí)分析中的強(qiáng)大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無需耗時(shí)耗費(fèi)資源的肽圖分析，所有這些都以相對(duì)較少的手動(dòng)操作時(shí)間快速完成。青海GlySERIASIdeS蛋白酶