與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括:OmniGlyZOR 微離心柱;PNGase F 凍干;RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性,否則某些 N-糖基化位點很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對EPO進行O-糖位點特異性消化:對于jin攜帶一個或幾個 O-糖基化位點的簡單底物蛋白,OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點。 OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖。河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學研究
Genvis測試去除唾液酸以揭示電荷變體:唾液酸是帶負電荷的糖殘基,存在于 N- 和 O-連接的聚糖上。唾液酸的固有電荷可能會使分析工作流程復雜化,從而掩蓋其他重要的修飾。Microspin 色譜柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. 樣品中不含酶。因此,唾液酸的去除有助于研究蛋白質中的潛在變體。該應用展示了一種快速簡便的樣品制備方法,可在電荷異構體分析之前去除所有唾液酸。河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學研究FucosEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的FucosEXO酶;
我們測量了FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO可有效釋放α1-2、α1-3和α1-4連接的巖藻糖,對α1-6連接的巖藻糖殘基沒有活Genovis的FucosEXO的底物特異性:巖藻糖以不同的鍵存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖常見于 O-聚糖中,并作為 N-聚糖的天線巖藻糖基化,而 α1-6 連接的巖藻糖被發現是 N-聚糖he心的修飾。β1-3,4半乳糖的水解:Genovis的GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物,可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。
水解O-聚糖的酶不會從變性中獲益,這就是為什么OmniGLYZOR色譜柱只能在天然條件下使用的原因。 OmniGLYZOR 試劑盒 Microspin 以含有足夠材料的試劑盒形式提供,可使5 × 50-100 μg 或 10 × 50-100 μg 糖蛋白去糖酸化。N-和O-連接聚糖的快速高效;與LC-MS兼容;完全去除聚糖,改進基礎蛋白的分析;固定形式可提高酶與底物的比率,從而實現快速去糖基化。 IgdE酶(FabALACTICA?)和PNGaseF酶分別購自Genovis(馬薩諸塞州,美國)。用于水解糖蛋白上N-聚糖的凍干酶。Genovis的PNGase F 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中,分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。倍篤生物代理多條產品線,用于聚糖分析用酶、ADC偶聯技術、QED抗體對、AAV中和抗體、IdeS蛋白酶等。
genovis的FucosEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性,使其與大多數樣品相容。此外,FucosEXO活性不依賴于任何可能影響LC-MS分析的輔因子,如BSA。根據底物的性質,FucosEXO 可在 1 至 2 小時內水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 連接的巖藻糖殘基,而對于非常復雜的樣品可能需要更長的孵育時間。FucoseEXO也可固定在離心柱中,可快速方便地處理高達0.5mg的糖蛋白。使用離心柱形式,將糖蛋白樣品與固定化的FucosEXO樹脂一起孵育,然后在離心步驟中輕松收集消化的糖蛋白。GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯的GalactEXO酶。海南固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶
GalactEXO微離心柱經過格式化,可在30-60分鐘內水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學研究
為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力,用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應條件在一小時內有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖,以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當加入RapiGest?并在變性條件下進行反應時,西妥昔單抗的所有N-聚糖(包括Fab-聚糖)在PNGase F固定化10分鐘內完全去除,PNGase F固定化15分鐘內完全去除。在變性反應條件下,PNGase F 在 30 分鐘內成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應條件,將常用的糖蛋白標準品RNase B在10或15分鐘內完全去糖基化,分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。河南瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學研究