蛋白純化試劑，抗體純化產品rProtein G Beads 4FF是用于分離和純化lgG的親和層析介質，具體性能見表1。Protein G是一種分離自G Streptococci的細胞壁蛋白，它可通過其Fc片段結合哺乳動物IgG。重組protein G含有高親和結合位點，減少了非特異性吸附。Protein G和Protein A有不同的lgG結合特性，相比Protein A， Protein G對牛、羊、馬等多克隆抗體有更強的結合力，它還可以結合不能與Protein A很好結合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1，具體結合能力見表2。rProtein G Beads 4FF是以高度交聯的4%瓊脂糖凝膠為基質，可以在相對較高的流速下進行單克隆抗體和多克隆抗體的純化。中壓預裝柱HiPur系列HiSelect Ni 6FF。江蘇離子交換試劑代理廠家

蛋白純化試劑，上海楚知生物代理天地人和，1.產品介紹NiIDABeads可以用于各種表達來源（如大腸桿菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳動物細胞）的組氨酸標簽（6xHis-tagged）蛋白的純化。它是以4%瓊脂糖凝膠為基質，通過化學方法偶聯了三配位的亞氨基二乙酸（IDA），螯合鎳離子（Ni2+）后，可以形成比較穩定的平面四邊形結構，從而有更多的位點與組氨酸標簽上的咪唑環繼續配位，達到結合目的蛋白的效果（產品化學結構見圖1所示）。但是，這樣的結構比較容易受到其他小分子的進攻，鎳離子易被還原或者被螯合，從而破壞其化學結構，無法結合目的蛋白。NiIDABeads具有載量高，性價比高的優點湖南核酸提取試劑哪種品牌好上海天地人和經銷商聯系方式.

蛋白純化試劑Ni Smart Beads純化流程2/3常州天地人和生物科技有限公司平衡液：20mM磷酸鹽，0.5MNaCl，pH7.4洗雜液：20mM磷酸鹽，0.5MNaCl，0-5mM咪唑，pH7.4洗脫液：20mM磷酸鹽，0.5MNaCl，250mM咪唑，pH7.4注：為了減少宿主細胞蛋白的洗脫，建議在洗雜液中加入低濃度的咪唑。為了消除一些離子作用蛋白的吸附，可以在溶液中加入0.5M-1.0MNaCl?？梢圆捎玫蚿H值洗脫或與咪唑結合，如pH2.5-5.0。2.2樣品準備1)將細胞培養液轉移至離心杯，7,000rpm(7,500×g)，離心15min取上清。如果使用預裝柱，樣品在使用前比較好用0.22μm或者0.45μm濾膜過濾除菌。2)樣品中含有可耐受范圍內試劑，不需要透析或濃縮，可以直接上樣。2.3樣品純化流程1)將NiSmartBeads裝入合適的層析柱，層析用5倍柱體積的平衡液進行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。2)將樣品加到平衡好的NiSmartBeads中，保證目的蛋白與Ni2+充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液。3)用10-15倍柱體積的洗雜液進行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。4)使用5-10倍柱體積的洗脫液，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

蛋白質純化注意事項：在進行任何一種蛋白質純化的時候，都要時刻注意維護它的穩定性，保護它的活性，有一些通用的注意事項需要牢記，它們包括：1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫內進行。2、不要太稀，蛋白濃度維持在μg/mL～mg/mL。3、合適的pH，除非是進行聚焦層析，所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同，防止蛋白質的沉淀。4、使用蛋白酶抑制劑，防止蛋白酶對目標蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質時，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA對蛋白的污染。5、避免樣品反復凍融和劇烈攪動，以防蛋白質的變性。6、緩沖溶液成分盡量模擬細胞內環境。7、在緩沖溶液中加入0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇），防止蛋白質的氧化。8、加1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑，防止重金屬對目標蛋白的破壞。9、使用滅菌溶液，防止微生物生長。   ；選試劑上海楚知生物更高的抗體結合能力。

蛋白純化試劑，rProteinA/GBeads4FF加抗體純化流程3)再向其中加入1ml終止液，懸浮填料，終止交聯反應，在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管，約15min后，800rpm離心1min，再吸棄上清。4)加入0.5ml的洗雜液，懸浮填料，進行清洗，800rpm離心1min，吸棄上清。再重復兩次。2.4.3抗原沉淀反應1)抗原吸附：加入含有抗原的樣品，用移液器輕輕吹打使抗原與填料-抗體復合物均勻分散。在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管10min，使抗原與抗體充分結合，如結合力較弱則可在室溫下反應1h或者在4℃下反應過夜。2)洗雜：將上述完成抗原吸附的填料-抗體-抗原復合物進行離心，800rpm離心1min，收集上清液，置于冰上以備后續檢測。向離心管中加入1ml洗雜液，用移液器輕輕吹打使填料-抗體-抗原復合物均勻分散，然后進行離心分離，800rpm離心1min，棄上清液。再重復洗滌兩次。***加入1ml洗雜液，用移液器將填料-抗體-抗原復合物懸液轉移至新的1.5ml離心管中，并進行離心分離，800rpm離心1min，棄上清液抗體親和純化產品分為通用性抗體，單克隆抗體，多克隆抗體。江蘇蛋白純化試劑哪里買

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蛋白純化試劑，rProteinA/GBeads4FF加抗體純化流程3)抗原洗脫：提供以下兩種抗原洗脫方案，可根據后期檢測的需要選擇不同的抗原洗脫方法。變性洗脫法：此方法洗脫的樣品適用于SDS-PAGE檢測。向離心管中加入25μl1×SDS-PAGELoadingBuffer混合均勻，95℃加熱5min。然后進行離心，800rpm離心1min，收集上清液，進行SDS-PAGE電泳，轉膜后進行Western分析。非變性洗脫法：此方法洗脫的樣品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向離心管中加入5倍柱體積的洗脫液，用移液器吹打5次，混勻，然后在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管，10min后，離心，800rpm離心1min，吸取上清液，收集洗脫組分，即為目標抗原，收集上清液至新的離心管中，并立即加入十分之一體積的中和液，將洗脫組分pH調節至7.0-8.0，用于后期功能分析。江蘇離子交換試劑代理廠家

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