隨著膜孔徑減小,膜的實際可用表面積遞增,膜結合蛋白的量也遞增. 估量表面積的參數為表面積比率(實際可用表面積與所用膜平面積的比率).另外, 膜孔徑越小,層析速度也越小,那么金標復合物通過T線的時間也就越長,反應也就越充分.綜合以上兩點,結論為膜孔徑越小靈敏度越高.但是同時也減慢了跑板速度,增加了非特異性結合的機會,也就是假陽性越高.所以要按照試驗結果挑選適合實際項目的膜,找到合適的平衡點。首先,單克隆抗體與膜的結合優于多克隆抗體, 主要時由于多克隆抗體有很多不同的表面位點, 而各位點與膜的較佳結合條件都有細微的差別, 毫無疑問就增加了優化難度。其次,分子量越大,蛋白越難結合到固相材料上。膜材料具有長久效用和優異的穩定性。遼寧透明反光轉印膜價位
安裝轉印槽子:將濾紙和海綿放入電印跡緩沖液中浸泡一下,依次按照海綿、濾紙、PVDF膜、凝膠、濾紙、海綿的次序將電印跡夾層裝好,并放入小型電轉槽中;電印跡轉移:于轉印條件下(50V,100-170mA)室溫進行電印跡轉移,轉移時間一般為5-2小時(根據蛋白質具體分子量大小而定);PVDF膜染色前處理:取出PVDF膜并用去離子水漂洗,用甲醇浸泡數秒鐘,然后進行染色;膜染色:染色劑30-50秒(切勿超過1分鐘),50%甲醇脫色(勤換脫色液),之后用去離子水充分洗滌后晾干即可。轉印膜是一種經濟型選擇,用于核酸和蛋白質印跡實驗方案。這種硝化纖維素轉印膜,是Southern、colony/plaque以及蛋白質實驗方案中較初使用的膜。NC HATF所含的混合纖維素酯基質,不含在細胞生長過程中會干擾細胞壁完整性的表面活性劑。這些膜用于colony lifts。NC HAHY所含的混合纖維素酯基質,所帶的表面活性劑能夠增強可濕性以及轉印過程中的處理能力。兩種膜對核酸和蛋白質都具有高吸附容量。適用于常規轉印。紹興帶電尼龍膜生產公司使用PVDF轉印膜進行轉印具有較低的成本。
如何選擇膜?經常會遇到的問題是,我是做什么項目的,我該選擇那類膜?這里涉及到一個膜的分類標準問題,一個供應商可能提供這個膜是8um,但另一個供應商告訴你膜是135s的。這之間的區別與聯系是什么?um指的是膜孔徑,而從上面膜的生產過程,我們可以看出,膜的孔徑實際上是沒有辦法界定的。由于干燥成型等過程的非均一,膜的孔徑也是非均一的.膜孔徑的說法實際上是沿用了一直以來的一個形象稱呼.而以秒為單位的定義為,每4cm膜,水的層析時間是140s.該單位已經越來越被各大廠商所接受,成為了一個通用的比較標準.以下我們將采用s單位來進行交流。換算情況大致為:8um=135s;6um=180s。
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔徑有大有小,隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量的蛋白結合就越牢固。PVDF膜大于20kda的蛋白選用0.45um的膜,小于20kda的蛋白選用0.2um的膜。PVDF膜在使用時需預處理,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團,使其更容易與帶負電的蛋白結合。PVDF膜具有較高的機械強度,是印跡法中的理想固相支持物材料。1、水處理用PVDF膜,分為超濾膜和微濾膜兩種,主要用于污水、海水淡化等的前處理,去除大分子、細菌、泥沙等雜質2、戶外建筑用PVDF膜,主要用戶戶外建筑的玻璃、外墻、戶外廣告牌等的保護,主要是耐老化和耐磨功能3、電池用PVDF膜,包括在燃料電池和鋰離子聚合物電池中的隔膜應用。PVDF轉印膜能夠為產品帶來獨特的外觀效果和優異的質感。
硝酸纖維素膜又稱為NC膜, 在膠體金試紙中用做C/T線的承載體,同時也是免疫反應的發生處。所以NC膜成為該試驗中較重要的耗材。原料硝酸纖維素粒子是一種非常普遍的有機化學物,溶解形成混漿,在該漿體內,會加入一定比例的試劑來調整之后形成的膜的性質,一般是一個試劑配方,主要包含表面活性劑/高分子聚合物/鹽離子/成型劑等溶解在一個緩沖體系內。配好的勻漿通過滾筒,形成了一張薄膜,平攤在十分光滑的平面載體上.這個和造紙的過程是非常相似的。在勻漿內的成型劑開始揮發,膜逐步干燥成型.同時在這個過程中由于溫度比較高,有些廠家在這個過程采取了在密閉腔體內成型,同時補充配方溶液的形式,來避免一些有效成分的蒸發。之后經過切割就能夠生產出我們想要的大小的NC膜了。PVDF轉印膜能夠滿足高精度印刷的需求。嘉興蛋白吸附轉印膜訂做
使用PVDF轉印膜能夠提高產品的附加值。遼寧透明反光轉印膜價位
硝酸纖維素膜/PVDF膜:用于蛋白免疫印跡的固相載體有多種,硝酸纖維素膜及PVDF(聚亞乙烯雙氧化物)膜較為常用。硝酸纖維素膜具有結合 能力強,膜不需要活化,背景淺,能進行多次免疫檢測并且功能基團壽命長等優點,但極易破碎不易操作。PVDF膜在制備多肽供蛋白質化學分析中較為常用。它 具有較強的蛋白質結合能力和高信噪比,所以不會因為重復使用探針而使蛋白質丟失。另外,膜的開放孔結構使其更容易與被吸附的蛋白質結合。可用于Western雜交、dot/slot 雜交、蛋白質測序、以及MS分析。適用于Southern/Northern/Dot/Slot Blot/Colony Lift實驗和Western、蛋白質測序以及MS分析。遼寧透明反光轉印膜價位
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