質量和重心都應該平衡。注意速度和加速度不要太快,否則會直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心預冷至4度〉。膜和旋轉軸的方向根據說明進行調整(對于角向離心機,膜垂直于軸〉。在實際應用中,一般的速度開度比手動低,可以延長離心管的使用壽命。4。當濃縮到剩余的1毫升時,取中國產的504.1l布拉德福德溶液,加104 l流過,看是否變藍,以判斷ur管是否漏蛋白。如果管道泄漏,重新倒入上層,然后流過新管道開始超濾。為了準確確定管道是否泄漏,用5 mg/ml BSA離心10分鐘,然后將其穿過,大致運行膠水或Bradf ord,繼續添加剩余的蛋白質溶液以濃縮(在冰上操作以防止蛋白質加熱〉,直到所有濃縮物都添加完畢。離心過程中應注意是否有蛋白質沉淀,導致堵塞。如果發生沉淀,有必要確定沉淀的具體原因是蛋白質濃度過高還是緩沖液不當。超濾離心管通常由聚碳酸酯或聚丙烯制成,具有強度高和化學惰性。山東30K超濾離心管規格
超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標分子量選擇適當的超濾離心管,為了得到較高的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復加樣離心。如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質,可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,重復2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心,雖然優良品質的產品都有防死端設計,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。金華超濾離心管定做超濾離心管還可以用于濃縮樣品,減少其體積并提高濃度。
可以通過多個超濾管同時超濾來降低濃度,而后者通過改變不同的緩沖液直到沒有蛋白質沉淀。用來濃縮蛋白質的。如果要更換緩沖液,當總蛋白溶液濃縮到1毫升左右時,輕輕添加一個新的緩沖液〈用0.22um超濾膜超濾后〉,然后連續濃縮到1毫升左右。濃縮液的之后體積取決于所需的蛋白質濃度,通常不超過500 ul,但也要濃縮到200 ul以下。根據每次至少10次的體積濃度計算,1000次以上的3次基本可以達到更換緩沖器的目的。提取之后濃縮蛋白的操作在冰上進行。黃色設備頭(200ul)用于提取之后的蛋白質濃縮物。設備頭沿設備頭邊緣輕輕插入。將蛋白溶液輕輕吹勻。注意不要觸摸超濾膜。吸取濃縮液,一次較多吸200 ul,直至耗盡。之后留在管底的濃縮液不需要吸收,否則太困難,可能損壞超濾膜。之后,在無超濾膜的超濾管中加入milliq水,以防止超濾膜干燥。
注意:超濾離心管中的濾膜一旦潤濕 后應避免變干。如果在預清洗后不是立即使用,則讓液體保留在濾膜上,直到使用。6.使用方法:1).將超濾內管插入所提供的一個微量離心管中。2).向超濾管內管中加入不超過500 μL的樣本,并蓋上蓋子。3).將蓋好蓋子的超濾管放入離心轉子中,讓蓋子的連接帶朝著轉子的中間;用一個類似的超濾管平衡。4).以14,000 x g離心約10-30分鐘,具體時間取決于所使用超濾管的NMWL。5).離心結束后將整個超濾管從離心機中取出,取出內管。6).為了回收濃縮后的溶質,將內管倒過來插在-個干凈的微量離心管中。放在離心機中,讓打開的蓋子朝著轉子的中間;用一個類似的超濾管進行平衡。以1 ,000 x g離心2分鐘,使濃縮后的樣本從超濾內管轉移到收集管中。超濾液可以保存在收集管中。超濾離心管利用離心力和超濾膜將分子分離和過濾出來。
離心管主要有塑料、不銹鋼制成,塑料離心管常用資料有聚丙烯(PP).聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC)等。其中PP管性能較好,塑料離心管的優點是透明(或半透明),硬度小,可用穿刺法取出梯度,缺陷是易變形,抗有機溶劑腐蝕性差,運用壽命短;不銹鋼離心管強度大,不變形,能抗凍,抗熱,抗化學腐蝕,但用時要防止接觸強腐蝕性的化學藥品、如強酸、強堿等化學試劑。這里主要介紹塑料離心管:塑料離心管都有管蓋,離心前管蓋必需蓋嚴,倒置不漏液。管蓋有三種作用:①避免樣品外泄,用于有放射性或強腐蝕性的樣品時②避免樣品揮發③支持離心管,避免離心管變形。超濾離心管還可以用于檢測樣品中的元素、抗體等生物活性分子。青島濃縮超濾離心管售價
超濾離心管可根據不同孔徑大小選擇超濾膜,以便過濾出所需大小范圍內的目標分子。山東30K超濾離心管規格
選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。山東30K超濾離心管規格
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