超濾離心管使用注意事項:當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉淀,導致堵管。若發生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發生沉淀為止。使用超濾離心管時應注意避免污染和交叉傳播,并對設備進行徹底清潔消毒。上海再生纖維素離心管廠家
超濾離心管只需5到15分鐘,即可對50到500L樣本進行簡便、可靠的濃縮與脫鹽處理:快速處理樣本。通常,回收率高于90%;備有低蛋白質結合的Omega、Bio-Inert或GHP濾膜可供選擇。對應各種截留分子量,備有各種編碼以供輕松識別的顏色可供選擇。結構材料為低結合聚丙烯。超聲焊接密封,防止側流或密封不嚴。適用于配合1.5mL試管的標準離心轉子。超濾離心管通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質樣本處理,特別是較稀的蛋白質溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附較小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結合的程度隨著個別蛋白結構的不同而不同。北京外泌體超濾離心管廠家電話超濾離心管還可以用于濃縮樣品,減少其體積并提高濃度。
超濾離心管,備有四種材質的超濾膜:聚醚砜、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart,可根據不同要求靈活選用;兩種回收濃縮液的方法:既可用吸管直接吸取并回收,又可將離心管放入離心機反甩,將濃縮液甩入回收帽中,加蓋保存。這兩種方法都可使濃縮液達到近乎完全回收;截留分子量普遍,配有3K、5K、10k、30K、50K、100K、300K、1000K、0.2μl的聚醚砜膜;新推出產品膜2K型,具有極低的蛋白吸附特性,高流速、高通量,是免疫球蛋白濃縮和脫鹽的理想用膜。用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再 濃縮至1ml左右,連續三次,之后一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
超濾作為一種膜分離技術,普遍應用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,其原理是溶液在力的作用下,通過超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來,而水、溶劑和低分子量溶質則允許透過膜,從而達到濃縮、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點是操作簡便、快速、高效,可同時濃縮和純化分子。如何使用超濾心離心管1. 使用角轉子加到超濾裝置上,較大樣本量為15 毫升(Anavo Ultra-15)。2. 將帶蓋過濾裝置放入離心機轉子內; 用一個類似的裝置來平衡。3. 使用定角轉子時,將薄膜面板朝上定位,較大旋轉 5000 xg,旋轉 30 分鐘。4. 為了回收濃縮的溶質,在過濾裝置的底部插入一個移液管,通過左右掃動的方式將樣品抽離,以保證總回收率。超濾液可貯存在離心管中。說明:為達到較佳回收率,離心后應立即取出濃縮樣品。超濾離心管可以用于檢測樣品中的蛋白質、碳水化合物等有機分子。
超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標分子量選擇適當的超濾離心管,為了得到較高的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復加樣離心。如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質,可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,重復2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心,雖然優良品質的產品都有防死端設計,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。超濾離心管在臨床診斷中也具有重要作用,如腎功能檢測、腦脊液分析等領域。上海再生纖維素離心管廠家
使用超濾離心管時要注意控制轉速,以避免過度旋轉導致超濾膜損壞或溢出樣品。上海再生纖維素離心管廠家
超濾離心管應用:1、組成部分:該裝置包括一個蓋子、一個過濾器和一個50ML的離心管。2、帶有擺桶式或定角式轉子的離心器以及可以容納50mL試管的樣本腔/試管座。①注意:為了避免在離心過程中損壞裝置,在旋轉前請檢查間隙。 3、帶有200微升(μL)的移液管,用于濃縮液回收適用性。①注意:該產品未經消毒,只供一次使用,保質期3年。為確保對預定用途的適用性,建議進行初步的回收和截留試驗。4、濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸(單株或雙株DNA/RNA樣本)、微生物、洗出液和凈化樣本的生物樣本。5、凈化組織培養基提取液和細胞溶解液中的大分子成分,從反應混合液中去除引物、連接或分子標記,在HPLC之前去除蛋白質。上海再生纖維素離心管廠家
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