多克隆抗體免疫動物:免疫用的動物建議選擇適齡的健康雄性動物,雌性動物特別是妊娠動物用于制備免疫抗體則非常不合適,有時甚至不產生抗體。由于對免疫應答的個別差異,免疫時應同時選用數只動物進行免疫。 抗原是多種多樣的,而且千差萬別。就其化學成分而言,有蛋白質抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言,有完全抗原和不完全抗原。為了獲得較好的抗血清,建議是選用蛋白質抗原,如要制備用于篩選細菌表達的 cDNA 文庫或免疫印跡的抗血清,建議選用可降解的蛋白質抗原。不同的抗原,其免疫原性的強弱均不相同,這種免疫原性的強弱取決于抗原的分子量、化學活性基團、立體結構、物理形狀和彌散速度等。抗體的半衰期較長,可以在體內持續發揮作用,保持免疫防御的持久性。廣州IgD抗體補給公司
多克隆抗體免疫動物:免疫劑量與注射途徑有關,一般而言,靜脈注射劑量大于皮下注射,而皮下注射又比掌內和跖內皮下注射劑量大,也可采用淋巴結內注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,對家兔而言,采用弗氏完全佐劑,則需注射 0.5mg~1mg/kg./次,如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法。如需要獲得高效價的抗血清,宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者,可少量多次。免疫周期短者,應大量少次。 兩次注射的間隔時間應長短適宜,太短起不到再次反應的效果太長則失去了前一次激發的敏感作用。一般間隔時間應為 5~7 天,加佐劑者應為 2 周左右。 注射的 Ig 純度高,則一般不易引起過敏反應,如注射血清,即使是少量,在再次免疫時,極易引起過敏反應,所以一定要采取措施。深圳IgG抗體試劑抗體(antibody)是指機體由于抗原的刺激而產生的具有保護作用的蛋白質。
抗體基本結構:天然Ig分子含有四條異源性多肽鏈,其中,分子量較大的兩條鏈稱為重鏈(heavy chain,H),而分子量較小的兩條鏈稱為輕鏈(Light chain,L)。同一Ig分子中的兩條H鏈和兩條L鏈的氨基酸組成完全相同。重鏈分子量為50 000~75 000,由450~550個氨基酸殘基組成。重鏈恒定區的氨基酸組成和排列順序不同,其抗原性也不同。據此,可將抗體分為5類(class),即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相應的重鏈分別為μ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈和ε鏈。不同類的Ig具有不同的特征,如鏈內和鏈間二硫鍵的數量和位置、結構域的數量及鉸鏈區的長度等均不完全相同。
抗體主要功能:中和有害素和阻止病原體入侵。識別并特異性結合抗原是抗體的主要功能,執行該功能的結構是抗體的V區,其中CDR部位在識別和結合特異性抗原中起決定性作用。抗體有單體、二聚體和五聚體,因此結合抗原表位的數目也不相同。抗體結合抗原表位的個數稱為抗原結合價。Ig單體可結合2個抗原表位,為雙價。SIgA是二聚體,可結合4個抗原表位,為4價。IgM是五聚體,理論上可以結合10個抗原,應該是10價,但由于立體構象的空間位阻,使IgM一般只能結合5個抗原表位,故為5價。抗體的多樣性來自于基因重排和突變,使其能夠識別各種不同的抗原。
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的,由一種抗原決定簇刺激機體,由一個B淋巴細胞接受該抗原刺激所產生的抗體稱之為單克隆抗體(MonoclonalAntibody)。由多種抗原決定簇刺激機體,相應地就產生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體,機體內所產生的抗體就是多克隆抗體;除了抗原決定簇的多樣性以外,同樣一種抗原決定簇,也可刺激機體產生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。抗原刺激機體,產生免疫學反應,由機體的漿細胞合成并分泌的與抗原有特異性結合能力的一組球蛋白,這就是免疫球蛋白,這種與抗原有特異性結合能力的免疫球蛋白就是抗體。抗體的中和作用是通過阻止病原體與宿主細胞結合而抑制傳染的擴散。廣州IgD抗體補給公司
特異性抗體可以針對不同的病原體或細胞表面分子,提供精確的免疫保護。廣州IgD抗體補給公司
單克隆抗體(monoclonal antibody,Mab)技術是20世紀免疫學技術的一項里程碑式突破。該技術將免疫小鼠的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合生成雜交瘤細胞,這種雜交瘤細胞核內含有雙親細胞的染色體,繼承了親代細胞的特征。它既具有瘤細胞在體外培養中迅速增殖的能力,又具備免疫脾細胞合成和分泌特異性抗體的特性。隨后用適當方法把雜交瘤細胞分離出來,進行單個細胞培養,使之大量繁殖,在培養液中形成單個雜交瘤細胞的克隆(也稱細胞系)。由于每個B淋巴細胞只有合成一種抗體的遺傳基因,所以單個雜交腐細胞的克隆也只能產生一種專一性抗體,即單克隆抗體。這種制備產生單克隆抗體的技術被稱為單克隆抗體技術。廣州IgD抗體補給公司