二代測序——轉錄組測序的背景和基本原理

1、背景：在基因表達過程中，DNA 轉錄為 RNA，轉錄后的 RNA 會經過一系列加工，包括剪接等過程形成成熟的 mRNA，然后進行翻譯產生蛋白質。轉錄組測序可以讓我們在全基因組范圍內研究基因的表達情況，相比于傳統的基因表達研究方法（如芯片技術），它具有更高的分辨率和更廣的檢測范圍。

2、原理：首先從樣本（如細胞、組織）中提取總 RNA，然后將 RNA 反轉錄為 cDNA（互補 DNA）。這些 cDNA 會構建測序文庫，在文庫中加入特定的接頭序列，以便后續在測序平臺上進行測序。測序過程中，測序儀會讀取 cDN**段的堿基序列信息。通過生物信息學分析，將這些短序列（reads）比對到參考基因組或進行從頭組裝（如果沒有參考基因組），從而確定轉錄本的序列和表達量。 二代測序廣泛應用于基因組學研究。寧夏哪里有二代測序公司

什么樣本可以做二代測序？①

1、血液樣本

全血：這是最常見的樣本類型之一。血液中含有白細胞，其細胞核內有完整的基因組DNA。通過提取白細胞中的DNA，可以進行全基因組測序、全外顯子組測序等。例如，在遺傳病的基因診斷中，抽取患者的全血，提取DNA后，對與疾病相關的基因或整個外顯子組進行測序，以尋找致病突變。

血漿/血清：其中含有游離的DNA（cfDNA）和RNA（cfRNA）。在**患者中，腫瘤細胞會釋放其DNA片段進入血液循環，這些cfDNA被稱為循環**DNA（ctDNA）。通過對血漿中的ctDNA進行測序，可以實現**的早期篩查、***過程中的動態監測等。例如，對于肺*患者，檢測血漿中的ctDNA來追蹤**的基因突變情況，為靶向***提供依據。 貴州嘉安健達二代測序價格二代和三代測序的區別？

①二代測序一般多久出結果？

二代測序（Next-GenerationSequencing，NGS）出結果的時間會受到多種因素的影響，一般在數天到數周不等。

1、樣本類型和質量

不同的樣本類型處理時間不同。例如，血液樣本相對容易處理，提取DNA的過程比較常規。如果是組織樣本，可能需要先進行樣本的解離等復雜操作。如果樣本質量高，DNA提取和文庫構建等前期工作會比較順利，能加快整體進程。但如果樣本量少或者DNA有降解等質量問題，可能需要重新提取樣本或者進行DNA修復等操作，這會**延長時間。例如，對于新鮮血液樣本，DNA提取可能在1-2天內完成；而對于一些福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織樣本，可能需要3-5天來完成高質量DNA的提取和后續的優化處理。

一代、二代、三代測序的技術原理和技術特點分別是什么？

技術原理：

一代—雙脫氧終止法

二代—橋式PCR+4色熒光可逆終止+激光掃描成像

三代—PacBio SMRT測序技術

技術特點：

一代—只能檢測序列一致的PCR產物；讀長可以較長，比如Sanger可以達到幾百bp；通量低，一次只能檢測少量的序列；成本低；

二代—可以并行測序；需要放大信號才能檢測；通量大，可以產生上G的reads；讀長較短，一-般是固定的，比如50、100、150、250等；成本較高

三代：可以并行測序；不需要放大信號，對單個分子進行測序；通量大，比如SequelII平臺，一張芯片可以有800萬個ZMW；讀長較長；測序精確度較差；成本高； 二代測序與Sanger測序相同嗎？

二代測序—全外顯子測序的優勢

針對性強：它主要聚焦于基因組中編碼蛋白質的區域，這部分區域雖然只占整個基因組的 1 - 2% 左右，但包含了大部分與疾病相關的突變。例如，在研究孟德爾遺傳病時，很多致病突變都位于外顯子區域，通過全外顯子測序可以更高效地找到這些突變。

成本效益高：相比于全基因組測序，全外顯子測序的成本相對較低。因為它不需要對整個基因組（包括大量的非編碼區域）進行測序，在一定程度上減少了數據量和測序成本，同時又能獲取大部分有重要功能意義的遺傳信息。 二代測序的原理是什么？四川二代測序檢測

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二代測序——蛋白質甲基化

概念及位置：蛋白質甲基化是指在蛋白質的氨基酸殘基上添加甲基基團。常見的甲基化修飾位點包括精氨酸（Arg）和賴氨酸（Lys）殘基。

作用

1、調節蛋白質 - 蛋白質相互作用：例如，組蛋白（染色體的組成成分）的甲基化可以改變染色質的結構和功能，影響基因的可及性。當組蛋白 H3 的賴氨酸殘基（如 H3K4、H3K9 等）發生甲基化時，會招募不同的蛋白質復合物，從而***或抑制基因轉錄。2、調節酶的活性：某些酶的活性可以通過蛋白質甲基化來調節。甲基化可能改變酶的活性中心的結構或者影響其與底物的結合能力。

檢測方法：質譜分析：這是一種***用于檢測蛋白質甲基化的方法。它能夠精確地確定蛋白質分子的質量，通過比較甲基化和未甲基化蛋白質的質譜圖，可以鑒定甲基化位點和修飾程度。 寧夏哪里有二代測序公司