外泌體的提取主要包括以下幾種方式：1、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。2、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養和體內注射。3、色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。外泌體可以通過多種方法給藥，靜脈內給藥是較常用的途徑。血液外泌體Dil

外泌體為細胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領域。外泌體還顯示出了在診療各種疾病（如心肌病和神經病）方面的潛力。但是，在實際應用外泌體之前，需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗。同時需要開發大規模生產質量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術和策略。另外，在研究和評估外泌體的副作用和功效時，必須考慮到肉瘤細胞來源的外泌體可能增強肉瘤生長的潛在風險。外泌體給藥途徑：給藥途徑是獲得所需功效的重要參數。外泌體可以通過多種方法給藥，但是，靜脈內給藥是較常用的途徑。通過利用增強通透性和保留（EPR）效應，在荷瘤動物中靜脈內遞送外來體似乎是有用的。在某些容易達到肉瘤部位的不同惡性肉瘤中，外泌體療法的給藥途徑是瘤內注射。在疾病部位直接注射外泌體的優點是可以特異性地運送裝載的藥物。另外口服給藥，腹腔給藥，皮內給藥和鼻內給藥途徑已成功用于外泌體遞送。外泌體囊泡如何破碎外泌體作為核酸的藥物遞送載體。

血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物，也可以進行機理研究？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質譜技術分析了患者血漿外泌體蛋白組，發現S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達，可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物。進一步，研究人員通過生信分析發現進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質主要與炎癥和氧化應激有關，而NF-κB通路正是承接此效應的關鍵通路。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調，進一步活躍NF-κB通路。該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標志物，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調控，不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路，促進CLL進展的特殊機理。

外泌體的來源與特征：外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體，通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成，其大小均一，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和肉瘤細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂質等，可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調節成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。

密度梯度離心法根據在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層，目前普遍應用的是蔗糖，這種方法可以成功地將亞細胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體和核內體）分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部，當施加離心力時，樣品中的顆粒以獨特的速率通過梯度，該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集，隨后可以通過分餾收集，密度梯度超速離心對從蛋白質聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣、費時且會造成外泌體損失。免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質會對電鏡結果造成影響。外泌體尺寸

外泌體提取在短時間（一周之內）使用，可以放在4度保存，如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。血液外泌體Dil

研究外泌體介導的microRNA的調控機制，第一步通過microRNA表達譜的檢測分析來源于肝病細胞的外泌體。第二步，應用肝細胞和外泌體共培養實驗得出以下結論：來源于肝病細胞的外泌體能促進肝病細胞的生長及遷移侵襲，且外泌體有運輸microRNA至受體細胞的功能。第三步，研究發現Vps4A是一個外泌體的重要調控因子，與肝病的發生有著密切的關系，Vps4A基因的表達下調肝病的發生及轉移相關。通過microRNA高通量測序發現Vps4A基因能導致外泌體分泌肝病相關的重要microRNA，與肝病的發生密切相關。血液外泌體Dil

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