DNA提取的一些問題,提取的細菌基因組DNA有降解,為什么?確認選用的培養菌體是否新鮮,如果菌體需要保存時,請于-80℃保存。起始菌液量過多,導致菌液裂解不充分,部分DNA降解。菌體本身富含DNA酶活性,加入Digestionsolution后再加20uL0....
逆轉錄的端粒復制:逆轉錄經常與細胞惡性轉化有關,艾滋、乙肝等很多疾病也有逆轉錄過程。所以相關研究可以為很多疾病的研究和防治提供幫助。逆轉錄酶抑制劑就一直是藥物研發熱點,例如抗HIV的nevirapine。逆轉錄酶缺乏校對(3'-5'核酸外切酶)功能,所以容易出...
microRNA提取方法及步驟:將吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm離心2分鐘,盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。取出吸附柱RA,放入一個RNasefree離心管中,根據預期RNA產量在吸附膜的中間部位加30-50μlRNasefre...
逆轉錄常見問題及解決方法之組織提取:RNAisolater可以提取miRNA嗎?可以提取miRNA。他普遍適用于培養細胞、動物組織、微生物以及代謝較少的植物組織,如幼苗、幼葉等。提取的RNA有基因組DNA污染:a)、向裂解液中加入氯仿后,需要在低溫下(2-8°...
植物蛋白提取試劑盒在利用液氮充分磨碎植物組織的同時,采用特殊的試劑對植物細胞釋放出來的蛋白進行沉淀,并使用蛋白酶抑制劑抑制蛋白酶活性,很大程度地保持所抽提蛋白質的完整性;而且蛋白抽提物呈干粉狀,有利于蛋白質的長期保存。植物蛋白提取試劑盒特點:1、提取的蛋白質是...
使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉子的選擇。“擺動桶”(SW)轉子和“定角”(FA)轉子,這些轉子的幾何形狀根本不同,因此沉降特性也不同。這些轉子之間的主要區別在于:FA轉子,與旋轉半徑相比,沉積顆粒的較大路徑長度通常較小,允許近似恒定遷移率并簡化描述...
探針法qPCR試劑盒使用方法:ProbeqPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行):1、如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析,...
DNA提取方法:核酸(nucleicacid)在生物界中堪稱主宰,是一類非常重要的生物大分子,它在生物的繁衍、發育、維持、衰老和死亡等一切生命活動中扮演著重要的角色,目前,核酸已成為生物化學、遺傳學以及其他有關生命學科的熱門研究課題,其覆蓋面之廣、進展之速為其...
逆轉錄酶還有DNA內切酶活性,這可能與病毒基因整合到宿主細胞染色體DNA中有關。逆轉錄酶的發現對于遺傳工程技術起了很大的推動作用,它已成為一種重要的工具酶。用組織細胞提取mRNA并以它為模板,在逆轉錄酶的作用下,合成出互補的cDNA,由此可構建出cDNA文庫(...
該如何選擇高質量、使用方便和廉價物美的試劑盒?準確度的測定:通常用回收實驗來衡量試劑盒的準確度。作回收實驗時,回收值不得超出線性范圍,回收率一般要求在100%±5%以內。對于一些無法準確加入的待測物(如酶和一些難以得到的標準待測物)也可以用對比實驗加以衡量。方...
分離外泌體的方法之微流控分離:基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法,納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個系統都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進行外泌體分離過程。外泌體的特異性很高,采用基于微流控芯片的免疫親和捕...
DNA檢測試劑盒的原理:細胞核染色質DNA斷裂是細胞凋亡的標志特征。在細胞發生凋亡時,核酸內切酶被開啟,選擇性降解染色質DNA,形成50-300kb的大片段,并進而在核小體連接處斷裂,形成180-200bp或其整倍數的DNA的片段,這些DNA的片段可從細胞中提...
該如何選擇高質量、使用方便和廉價物美的試劑盒?生化診斷試劑盒的質量是保證實驗室檢測結果準確性的關鍵因素之一。目前,由于臨床生化自動分析儀器的普及應用,商品化的不斷涌現。因此,如何選擇和評價高質量的、符合實驗室分析要求的,以及使用方便和價廉的試劑盒,不只是檢驗工...
如何選擇DNA提取試劑盒?你需要多少DNA?DNA試劑盒中通常包含了DNA純化所需的試劑和材料,例如醇、鹽溶液等。大多數DNA分離試劑盒公司都提供含有類似成分的試劑盒,這種試劑盒可以根據處理樣品的體積進行縮放。如下是一個基于大腸桿菌的DNA分離試劑盒推薦樣本體...
miRNA加尾法逆轉錄:miRNA,即microRNA,是一類非常短的RNA分子,只有幾十到幾百個核首酸,在正常細胞存活期間會產生大量的miRNA。miRNA起著重要的抑制作用,它可以抑制特定mRNA的表達以及細胞中內含物翻譯和轉錄等功能他們是催化機制,負責影...
DNA提取濃縮:一.固體聚乙二醇(PEG)濃縮:用透析袋外敷PEG至合適量。二.丁醇抽提濃縮:DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇,但DNA不會。因此重復幾次可明顯減少DNA體積。三.乙醇或異丙醇沉淀:(1)需要陽離子鹽的存在,NaAc較常用,NaCl對含SD...
RT-PCR逆轉錄引物設計原則:1.上下游引物要保守:擴增子長度需選擇一段保守片段(100-200bp)進行PCR擴增,選擇片段需跨越內含子,因內含子的基因組DNA序列不會被擴增,也可減少從污染的基因組DNA中擴增得到的假陽性風險。引物選取同樣需要保守。2.引...
DNA試劑盒是一種常用的實驗工具,用于從樣品中提取DNA。它可以應用于各種領域的DNA研究,例如醫學、生物學、犯罪學等。DNA試劑盒使用流程:樣品準備:首先,需要準備好樣品。樣品可以是各種生物組織、細胞、血液等。樣品的質量直接影響到提取DNA的效果,因此需要注...
外泌體分離方法之篩分分離法:該技術是通過膜從生物液體中篩分外泌體并通過壓力或電泳進行過濾來分離外泌體。篩分分離法的分離時間較短,但分離的外泌體純度卻處于較高的水平。篩分分離法的缺點在于分離的外泌體回收率較低。總之,細胞外泌體提取、外泌體分離在疙瘩等研究領域發揮...
DNA提取的幾種方法介紹,濃鹽法:利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M氯納提取化鈉抽提,得到的DNP黏液與含有少量辛醇的氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位于上層水相中,用...
對于外泌體的標記和鑒定,獲得外泌體之后,如何對其進行鑒定又是一個困擾研究者的問題。國際細胞外囊泡學會(ISEV)在2014年提議,對于分離獲得的外泌體需要從三個層面進行鑒定:WB檢測外泌體標志蛋白表達情況:外泌體膜上富含參與外泌體運輸的跨膜蛋白家族(CD63/...
血漿DNA與血漿游離DNA提取試劑有較高的提取得率。DNA核酸提取得率的確定,常用的是使用紫外分光光度計的方法。但是,血清、血漿dna樣本中游離核酸含量較低,如果直接用紫外法檢測,得出的數值并不準確,而且多次測量的結果會變異很大。關于提取得率,Qiagen的研...
外泌體的物理表征方法:常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法,例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡;動態光散射;納米粒子跟蹤分析;可調電阻脈沖傳感;和單個EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括:實時定量...
CHO細胞外泌體的分離和表征:CHO細胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質生產的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術從分批培養中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡,這些分析包括動態光散射(DLS)...
DNA提取的一些問題,提取的細菌基因組DNA有降解,為什么?確認選用的培養菌體是否新鮮,如果菌體需要保存時,請于-80℃保存。起始菌液量過多,導致菌液裂解不充分,部分DNA降解。菌體本身富含DNA酶活性,加入Digestionsolution后再加20uL0....
RNA逆轉錄實驗注意事項:去除基因組DNA污染:殘留的基因組DNA(gDNA)會對熒光定量結果造成很大的干擾,為了使結果更加的真實、可重復,我們需要去除gDNA干擾。我們可以在引物設計時避免gDNA的擴增,比如將上下游引物分別設在不同的外顯子上;或者在提取RN...
外泌體的構成:外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年,Valadi等發現鼠的肥大細胞分泌的exosome可以被人的肥大細胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質,不只是mRNA,exosomes所轉移的microRNA同樣具有生物活性,...
逆轉錄酶是存在于RNA病毒體內的依賴RNA的DNA聚合酶。RT-PCR實驗中的逆轉錄酶需要具有以下二種活性:依賴RNA的DNA聚合酶活性:以RNA為模板合成cDNA的首先條鏈。依賴DNA的DNA聚合酶活性:以一條DNA鏈為模板合成互補的雙鏈DNA。在選擇逆轉錄...
逆轉錄常見問題及解決方法之RNA濃度不高:a)、原始組織樣本或細胞量太少:提高加入量。b)、RNA發生降解:如果使用者確定提取RNA的試劑/器具沒有問題,RNA的降解通常發生在樣品破碎/勻漿階段。有兩個辦法可以徹底抑制內源RNase活性:1.立即加入裂解液并且...
如何選擇DNA提取試劑盒?你需要多少DNA?DNA試劑盒中通常包含了DNA純化所需的試劑和材料,例如醇、鹽溶液等。大多數DNA分離試劑盒公司都提供含有類似成分的試劑盒,這種試劑盒可以根據處理樣品的體積進行縮放。如下是一個基于大腸桿菌的DNA分離試劑盒推薦樣本體...