近年來,國內外利用某些細菌特有的酶,選擇相應的作用底物,研制出某些細菌專門用的的顯色培養基,用于細菌的分離鑒別,收到了良好的效果,這種顯色培養基實際上也是鑒別培養基。其基本原理是將色原(或熒光原)與細菌作用底物的結合物加于培養基中,當細菌含有相應酶時,使該結合物分解而顯色(或顯示熒光)。如色原糖苷結合物在糖苷酶作用下分解,使糖苷與色原分離,并顯示顏色;熒光氨基酸結合物(不顯熒光)在氨基肽酶作用下,使氨基酸與熒光物質分離而顯示熒光。常用顯色的色原有α-萘酚、β-萘酚、鄰位硝基酚、對位硝基酚、對硝基苯胺、酚酞、2-氨基4-硝基苯等;常用的熒光物有4-甲基傘形酮(又稱7-羥基4-甲基香豆素)等。目前,顯色培養基已用于多種細菌的分離鑒別培養,如沙門菌、大腸埃希菌、李斯特菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌、白色念珠菌等顯色培養基。培養基是用于微生物、細胞、組織等體外培養的營養精制的物質。MYGP培養基基礎
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時,需要注意一點:新配的培養基在經過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時,溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。碳酸氫鈉瓊脂基礎需要控制pH值、溫度、氣氛等因素,以保證培養基的穩定性。
按培養基的營養成分是否完全區分:1.基本培養基,亦稱“較低限度培養基”。只能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養基,稱為基本培養基,是含有營養要求較低成分的合成培養基,常用“[-]”表示。這種培養基往往缺少某些生長因子,所以經過誘變過的營養缺陷型菌株不能生長。2.完全培養基,基礎培養基添加血清等物質后,叫完全培養基,也叫(血清)細胞培養基。完全培養基可用來滿足微生物的各種營養缺陷型菌株的生長需要,常以“[+]”表示。3.補充培養基,凡是只能滿足相應的營養缺陷型生長需要的組合培養基,稱為補充培養基,它是在基本培養基中加入該菌株不能合成的營養因子而組成的。根據在基本培養基中加入的是A或B等營養因子代謝物而分別用[A]或[B]等來表示。
動物細胞培養必需的溶液,平衡鹽水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎溶液。PH調整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羥乙基哌嗪乙烷磺酸)細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素,每毫升培養液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素:終濃度為50ug/ml培養液。3)制霉菌素:濃度25U/ml,小瓶分裝,每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清,前者來源少,價格高;后者要求剛產下尚未哺乳的小牛,因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質、氨基酸、葡萄糖等。蛋白質主要是白蛋白和球蛋白。好氧菌需要富含氧氣和富含葡萄糖的培養基,而厭氧菌則需要采用無氧培養技術。
還有一些鑒別性培養基,是利用細菌特有的各種酶系統,能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質而產酸、產氣、產堿或產生其他可見物質,依此進行細菌的鑒別,例如常用的生化培養基。用于細菌生化特性試驗的培養基特點是在無糖的基礎培養基中加人某種特定的基質,并加人指示劑,細菌在此類培養基中的一系列生化反應結果,均通過指示劑顯示出來。此類培養基為生化反應鑒別培養基。根據用量又可分為常量生化培養基和微量生化培養基。值得注意的是生化試驗培養基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響,在配制和使用時,應根據實際情況嚴格掌握,防止有效成分被破壞,以保障其使用效果。培養基可以分為有機培養基和無機培養基兩類。YMA培養基
常見的培養基有LB培養基,YPD培養基,M9培養基和DMEM培養基等。MYGP培養基基礎
選擇性培養基(selective media) 選擇性培養基含有營養物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑),標本接種于此類培養基后,由于抑菌劑的選擇性抑制作用,使非目的菌受到不同程度的抑制,更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養基經過一定時間的增菌培養,再接種于選擇性鑒別培養基,可以提高目的菌的陽性檢出率。抑菌劑的種類很多,常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜、準確,有的劇毒,有的不耐高熱,配制時須特別注意。MYGP培養基基礎
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