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操作簡便酶標儀Elisa實驗

來源: 發布時間:2023-05-07

酶標儀的功能是用來讀取酶聯免疫試劑盒的反應結果,因此要得到準確結果,試劑盒的使用必須規范。許多醫院在使用酶標儀之前是通過目測判斷結果,操作過程隨意性較大,在使用酶標儀后如果不能及時糾正操作習慣,會造成較大誤差。在酶標儀的操作中應注意以下事項:
1.使用加液器加液,加液頭不能混用。
2.洗板要洗干凈。如果條件允許,使用洗板機洗板,避免交叉污染。
3.嚴格按照試劑盒的說明書操作,反應時間準確。
4.在測量過程中,請勿碰酶標板,以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手。
5.請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部,操作完成后請洗手。
酶標儀單波長檢測是指在一個波長下測量吸光度(也稱為終點法)。操作簡便酶標儀Elisa實驗

OD值由下述公式計算:
c為檢測物的濃度 b為檢測物的厚度 a為摩爾因子
在特定波長下測定每一種物質都有其特定的波長,在此波長下,此物質能夠吸收多的光能量。如果選擇其它的波長段,就會造成檢測結果的不準確。因此,在測定檢測物時,我們選擇特定的波長進行檢測,稱為測量波長。
但是每一種物質對光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們再選取一個參照波長,以消除這個不準確性。在參照波長下,檢測物光的吸收小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
甘肅多功能酶標儀智能化酶標儀常用波長為:405nm,450nm,490nm與630nm。

一般酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有比較大吸收,當pH值降為L 0時,比較大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。

熒光酶標儀原理:
由光源氙弧燈發出的光通過切光器使其變成斷續之光以及激發光單色器變成單色光后,此光即為熒光物質的激發光,被測的熒光物質在激發光照射下所發出的熒光,經過單色器變成單色熒光后照射于測樣品用的光電倍增管上,由其所發生的光電流經過放大器放大輸至記錄儀,激發光單色器和熒光單色器的光柵均由電動機帶動的凸輪所控制,當測繪熒光發射光譜時,將激發光單色器的光柵,固定在適當的激發光波長處,而讓熒光單色器凸輪轉動,將各波長的熒光強度訊號輸出至記錄儀上,所記錄的光譜即發射光譜。
酶標儀基于濾光方式的不同可分為濾光片式的酶標儀和光柵式酶標儀。

合適的軟件功能對于ELISA定量測定同樣很重要。有研究表明,四參數方程能較好地反映免疫測定的劑量反應曲線,*為適合于定量酶免疫測定的曲線擬合。因此,如目的是定量測定,則在酶標儀的軟件功能中,要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算,則可根據酶標儀的應用目的而定,如兼用于微量生化測定,則此類回歸計算就很有必要。此外,酶標儀兼做酶標動力學、凝集反應測定所需的軟件是否應具備,當然也應根據使用目的而定。由于此類軟件一般都較為昂貴,酶標儀常另外單獨按需配備,如果不是實驗室特殊需要,就不必強求這種軟件功能。濾光片作用是根據不同的波長選擇性地透過或反射光線,從而實現對樣品信號的分離和增強。甘肅操作簡便酶標儀高清觸屏

酶標儀是一種用途比較廣的生物檢驗醫療設備,利用酶聯免疫分析法,根據酶標記原理,進行定性或定量分析。操作簡便酶標儀Elisa實驗

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