如何測定的吸光度范圍?
通常,酶標儀的吸光度測定范圍在0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性。
對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。
酶標儀的光學系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀還有一個參比通道,每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何,均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現出來。光學系統好的話,則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
可見光和紫外光酶標儀分別采用鎢燈及氘燈作為光源。廣東酶標儀試用
酶標儀有單波長和雙波長檢測功能。有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具比較大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定;而“雙波長”則除了用對顯色具比較大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定外,同時用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進行測定,酶標儀打印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自于板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,比較好使用雙波長,且不必設空白孔。廣東酶標儀試用光柵型濾光系統具有使用方便,可以進行光譜掃描,靈活性等優點。
熒光酶標儀原理:
由光源氙弧燈發出的光通過切光器使其變成斷續之光以及激發光單色器變成單色光后,此光即為熒光物質的激發光,被測的熒光物質在激發光照射下所發出的熒光,經過單色器變成單色熒光后照射于測樣品用的光電倍增管上,由其所發生的光電流經過放大器放大輸至記錄儀,激發光單色器和熒光單色器的光柵均由電動機帶動的凸輪所控制,當測繪熒光發射光譜時,將激發光單色器的光柵,固定在適當的激發光波長處,而讓熒光單色器凸輪轉動,將各波長的熒光強度訊號輸出至記錄儀上,所記錄的光譜即發射光譜。
寶予德K3 Plus酶標儀為8通道垂直光路光密度檢測儀,其設計目的是執行標準的光度測量。
K3 Plus酶標儀的通用內置軟件允許采用終點法及動力學讀取模式。靈活的臨界值計算與曲線擬合算法,使K3 Plus酶標儀在各種診斷應用中數據操作的靈活性增強。擴展內存可以儲存多達500個測定方法。各軟件包為不同的測量與計算模式的結合(見4.2節)。各模式均采用自提示方式,從而減少誤差因子,簡化操作。
**多使用濾光片輪內的8個高質量的干涉濾光片選擇波長(400-750nm)。K3 Plus酶標儀包括標準濾光片,如405nm、450nm、492nm及630nm的濾光片。
可以通過USB接口連接打印機接口對讀數進行處理。
酶標儀單波長檢測是指在一個波長下測量吸光度(也稱為終點法)。
合適的軟件功能對于ELISA定量測定同樣很重要。有研究表明,四參數方程能較好地反映免疫測定的劑量反應曲線,*為適合于定量酶免疫測定的曲線擬合。因此,如目的是定量測定,則在酶標儀的軟件功能中,要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算,則可根據酶標儀的應用目的而定,如兼用于微量生化測定,則此類回歸計算就很有必要。此外,酶標儀兼做酶標動力學、凝集反應測定所需的軟件是否應具備,當然也應根據使用目的而定。由于此類軟件一般都較為昂貴,酶標儀常另外單獨按需配備,如果不是實驗室特殊需要,就不必強求這種軟件功能。酶標儀是一種用途比較廣的生物檢驗醫療設備,利用酶聯免疫分析法,根據酶標記原理,進行定性或定量分析。廣東酶標儀試用
酶標儀是實驗室常用的一種儀器,一般可以按照濾光方式的不同和功能的不同進行劃分。廣東酶標儀試用
酶標儀與分光光度計區別:
(2)光路的方向:分光光度計是水平光路,而酶標儀則是垂直光路。由于酶標板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。垂直光的特點是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
(3)光路的長度:由于光密度(OD值)與吸光系數, 待測組分的濃度以及光路長度成正比關系。分光光度計采用的比色杯的寬度通常是25px,所以光路長度固定為25px。因此不同儀器,不同批次測量的數據具有同樣的可比性。而酶標儀采用的是垂直光路, 所以光路的長度應該是液體液面的高度,所以測得的值受到樣品的體積的影響。
廣東酶標儀試用
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