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北京中鹽核酸酶70950-160

來源: 發布時間:2024-04-26

在生物工藝流程中,需要使用核酸酶去除終產品中的核酸污染,而核酸酶作為外源成份,也需要在生產流程中去除。核酸酶去除工藝包括熱滅活法、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右,包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9,來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右。因此,在同樣的條件下,從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易、更徹底。ArcticZymes廠家管控整個供應鏈及生產流程,協助客戶進行文件審計及現場審計。北京中鹽核酸酶70950-160

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慢病毒載體既可以轉導分裂細胞也可以轉導非分裂細胞,被認為是安全的,并且可以提供長期的轉基因表達,是目前較通用的基因轉移方法之一。因慢病毒載體能有效地轉導靶細胞,如造血干細胞和T細胞,在細胞和基因藥物中的應用越來越guang泛。源自人類胚胎腎細胞的HEK293細胞系是成熟的生產LV的系統,因為它們非常適合懸浮培養并且易于轉染。在無血清培養基中的懸浮培養在大規模生產中具有優勢,因為它消除了批次之間的差異并降低了不定因子污染的風險。海南生理鹽條件中鹽核酸酶70950M-SAN HQ中鹽核酸酶用在生產工藝流程中,在生理鹽條件下去除雙鏈及單鏈的DNA及RNA。

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經過多年的經驗積累及市場積淀,倍篤生物已組合多條不同產品線,分別滿足體外診斷、organoid及干細胞、細胞基因藥物等領域的需求。其中,細胞基因藥物領域產品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP級MSC/PSC培養基、GMP級膠原酶、AAV滴度檢測產品、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、AAV中和抗體蛋白酶等;相關品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德國BASF、德國Sartorius、德國Nordmark、瑞典Genovis、中國君研生物等。

ArcticZymes廠家對鹽活性核酸酶系列產品(Salt Active Nucleases,SANs)的生產及質控,在符合ISO13485:2016體系基礎上,增加了cGMP質控標準,如microbes、endotoxin、蛋白酶等,符合USP-EP要求。廠家提供HQ級別和GMP級別的SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶,從成本角度分別滿足臨床前和早期臨床階段、商業化大規模生產階段的需求;且GMP級SAN HQ高鹽核酸酶已完成在FDA的藥物主文件(Drug Master File, DMF)申報備案,助力加快藥物申報流程。在150mM NaCl條件下,M-SAN HQ中鹽核酸酶的酶切活性達到常規核酸酶的5倍左右。

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在生物工藝中,核酸酶的主要作用是高效消化宿主細胞DNA(HCD),并將其分解成足夠小的片段,以便在下游純化過程中去除。雖然大多數核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段,比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈,但實際生產中的核酸污染情況更加復雜。HCD通常以染色質形式存在,與細胞裂解碎片、病毒顆粒等結合在一起,影響核酸酶的識別及剪切。因此,HCD去除的關鍵在于——核酸酶如何在復雜的生產體系中識別并剪切HCD。M-SAN HQ中鹽核酸酶終產品經過0.22μm過濾;ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160

ArcticZymes的產品開發、生產、銷售和營銷過程均通過ISO13485質量標準的認證。北京中鹽核酸酶70950-160

大多數研究級別的慢病毒是通過批次濃縮而不是粗制劑之后應用的,濃縮基本上是通過兩步離心法產生的。在70000g通過超速離心濃縮后的慢病毒再通過蔗糖緩沖(50000g)純化,然后溶解在配方緩沖液中。一種改進,特別是純度方面的改進,基于離心/色譜聯用的純化方法。例如,Kutner等評估了組合純化/濃縮方法。蔗糖緩沖的超速離心結合陰離子交換層析獲得了88.2%的收率,而相反的組合則獲得了77.6%的收率。在兩種方法中,濃縮都超過了100倍,病毒滴度都超過了1010TU/ml(VSV-g包被的慢病毒)。北京中鹽核酸酶70950-160