Genovis提供色譜柱形式的FabRICATOR(IdeS)酶,是在鉸鏈下方對IgG進行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體,產生均質的F(ab')2和Fc片段。酶解后,可以使用反相HPLC、質譜或其他分析方法分析片段。抗體消化和亞基生成的自動化使生物反應器的在線監測應用成為可能,例如,作為2D-LC-MS設置的一部分,將反應器直接耦合到MS。這種自動化的抗體亞基分析方法減少了操作人員的時間、樣品處理時間并提高了通量。度拉糖肽的使用GlySERIAS酶切后,HPLC分析后,還鑒定了GLP-1肽的氧化。四川GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切
與IdeS不同,度拉糖肽由兩個胰高xue糖素樣肽-1 (GLP-1) 分子組成,它們通過柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區域。為了分別研究肽和 Fc 區域,從而鑒定結構域特異性 PTM,用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時。為了降低樣品復雜性,使用內切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖,并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對樣品的分析表明,使用GlySERIAS進行連接子消化后,肽從Fc區域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點,這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體,其中不同數量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外,還鑒定了GLP-1肽的氧化。盡管GlySERIAS同時在多個位點進行消化,但一式三份的酶解在獲得的不同Fc/2變體的相對量中顯示出可重復的結果。河南FabALACTICAIdeS蛋白酶抗體酶切用 Genovis的GlySERIAS Immobilized消化Romiplostim,產生均質的 Fc/2。
Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS)試劑盒可消化兔 IgG,但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段,您需要另一種填料,而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對處理兔IgG感興趣,請聯系Genovis團隊,我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡單性、速度和可重復性也意味著這種酶可以被用于質量控制應用。 QC方法需要執行簡單,易于訓練,高度可重復,數據易于分析,這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因為它適用于一系列不同的IgG,這也意味著使用FabRICATOR進行QC工作的客戶將能夠在未來的產品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。
大多數zhiliao抗體攜帶人 IgG1 骨架,雙特異性或多特異性形式的開發正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,例如單價結合、二硫鍵擾亂和配對 Fc 糖基化。傳統方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化,這需要優化以大限度地減少過度消化并獲得足夠的產量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE) 在鉸鏈上方的一個特定位點消化人 IgG1,以產生完整的 Fab 和 Fc 片段。該酶在大多數人IgG1 上也具有活性,其中鉸鏈區域以下的突變已被引入。為了證明FabALACTICA的性能,我們消化了不同的人IgG1抗體,并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后觀察到的定義峰顯示了不同人IgG1抗體的均質片段生成和強大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子,例如 Gly4Ser 和 GlyxSery (GS) 以及聚甘氨酸 (G) 接頭。
Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)與IdeS酶一樣是特異性蛋白酶。在二維核磁共振波譜 (2D-NMR) 之后,可以通過 HOS 分析在精確的原子水平上評估 mAb 的關鍵質量屬性。從Genovis的FabALACTICA Immobilized獲得均相Fab和Fc片段的工作流程,是評估嵌合單克隆抗體英夫利昔單抗中HOS的理想選擇,在海報“FabALACTICA產生純和均相的mAb亞基,促進2D-NMR波譜分析”中進行了描述。來自生成的 Fab 和 Fc 片段的高質量信號和光譜分辨率導致能夠觀察 Fab 和 Fc 之間的結構變化、氧化和非氧化樣品之間的差異,并通過觀察原子分辨率來比較原研劑和生物仿制藥的 HOS。也不需要任何額外的輔助因子,它將在不同生理緩沖中發揮作用。廣東FabDELLOIdeS蛋白酶蛋白組學
Genovis將固定化酶固定在磁珠上,用于在鉸鏈下方自動消化 IgG。四川GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切
與IdeS不同,Genovis的GingisKHAN(Kgp)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在鉸鏈上方的單個位點(KSCDK/THTCPPC)消化人IgG1,產生完整且均質的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點是人IgG1三維結構的結果,使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現額外的消化位點。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性,并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑(2mM半胱氨酸)與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物,研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應,并鑒定翻譯后修飾。四川GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切