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黑龍江GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

來源: 發布時間:2024-05-10

Genovis是一家瑞典生物技術公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學工具,主要用于生物制藥行業和學術界。我們在全球范圍內提供創新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發、生產和質量控制。您可以在我們的網站上“Application頁面”獲得更多應用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個“SmartStories”,也可以聯系我們。zhiliao性抗體和基于IgG的生物制藥的結構表征和監測關鍵質量屬性。黑龍江GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

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與IdeS不同,為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產物,用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質消化該蛋白質,該蛋白由與瓊脂糖珠共價偶聯的GlySERIAS酶組成。通過將酶偶聯到樹脂上,可以增加酶與蛋白質的比率,從而可以進一步加速反應,以獲得更完整的連接子消化。此外,該酶不會存在于樣品制備中,可能會干擾樣品分析。為了進行比較,度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過夜,或用GlySERIAS凍干1小時并在37°C下過夜消化。 為了降低樣品復雜性,使用內切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖,并減少鏈間二硫鍵。通過反相LC-MS對樣品的分析表明,GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結構域中的連接子,留下了接近均質的Fc/2產物,其中含有來自連接子的一個絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時或過夜消化,兩者都會產生幾種 Fc 產物,并附著不同數量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個樣品中以兩種變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質Fc/2能夠詳細研究特定于Fc區域的質量屬性。此外,在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補充,Fc/2 產物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子,有助于研究位于 GS 連接子的修飾。上海FabRICATORIdeS蛋白酶抗體酶切Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供。

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大多數zhiliao抗體攜帶人 IgG1 骨架,雙特異性或多特異性形式的開發正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,例如單價結合、二硫鍵擾亂和配對 Fc 糖基化。傳統方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化,這需要優化以大限度地減少過度消化并獲得足夠的產量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE) 在鉸鏈上方的一個特定位點消化人 IgG1,以產生完整的 Fab 和 Fc 片段。該酶在大多數人IgG1 上也具有活性,其中鉸鏈區域以下的突變已被引入。為了證明FabALACTICA的性能,我們消化了不同的人IgG1抗體,并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后觀察到的定義峰顯示了不同人IgG1抗體的均質片段生成和強大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。

與IdeS不同,Romiplostim 由四個相同的血小板生成素 (TPO) 受體結合肽和一個 Fc 片段組成,通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似,用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜,或用 GlySERIAS 凍干 1 小時并在 37°C 下過夜消化該蛋白質。 鏈間二硫鍵被還原,以便于通過反相LC-MS進行以下分析。與度拉糖肽的觀察結果類似,用固定化酶消化產生均質的 Fc/2,剩下一個連接子殘基,此處為甘氨酸殘基。這有助于識別專門位于Fc區域的修改。用凍干酶消化 1 小時得到 Fc/2,剩余 4 個甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個 TPO 肽連接。另一方面,這使得研究 Fc/2 和第yi個肽之間的連接區域成為可能,而不會受到第二個肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產生 2 個 Fc/2 變體,分別剩下 4 個和 1 個甘氨酸殘基。根據消化時間的不同,使用凍干產物釋放的肽以五或七種變體存在,接頭中殘留的甘氨酸殘基數量不同,而使用固定化產物釋放的肽以四種變體存在。Genovis的FabULOUS來源于化膿性鏈球菌,在大腸桿菌中表達,分子量為 29 kDa,該酶含有 His 標簽。

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與IdeS不同,Genovis的IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性蛋白酶,可在重鏈中CH2結構域下方的一個特定位點消化人IgM,產生均質的F(ab')2和Fc片段。該酶能夠對復雜和高分子量的人IgM進行中級分析,從而促進疫苗、zhiliao和診斷等過程中的IgM表征。獨特-可實現IgM的中級表征和質量控制;快速–在30分鐘內生成均勻的F(ab')2和Fc片段;高度特異性–人IgM重鏈中的一個消化位點。IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性酶,可在重鏈中CH2結構域下方的一個特定位點消化人IgM,產生F(ab')2和Fc片段。消化在30分鐘內完成,并且由于酶的特異性,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風險。該酶在pH值為5.5至9.0時具有活性,不需要還原條件或輔助因子即可發揮活性。良好的活性是在37°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化。IgMBRAZOR在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為38kDa。人IgA1比IgA2具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區域。北京IdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

高特異性也意味著相同的消化方案可以作為平臺方法應用于許多不同的抗體。黑龍江GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis酶的適應性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法,這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進,在表征實驗室中有更大的能力進行更多類型的分析,或者在工藝開發或QC實驗室中有更先進的分析儀器。 當涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時,例如克隆篩選,工藝開發和驗證以及穩定性研究,這是非常好的。 此外,Genovis產品的效率、健壯性(Robust)和易用性使它們更容易應用于這些類型的工作,而且,也適用于受控環境中的批次放行方法。Genovis的產品很好地支持這種類型的工作,這也促使Genovis不斷推出新產品和現有產品的不同形式,以支持客戶的工作。黑龍江GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶