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作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分,IgA在自身免疫性疾病、過敏反應(yīng)、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發(fā)揮作用。在天然條件和復(fù)雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫(yī)學(xué)和研究中具有重要價(jià)值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復(fù)雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個(gè)顯著結(jié)構(gòu)差異是鉸鏈區(qū)域。與IgA2相比,IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區(qū)域。IgASAPSub1的消化位點(diǎn)位于該擴(kuò)展區(qū)域,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區(qū)域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性??墒褂肍abULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。湖南GingisKHANIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶
抗體由于其大小和復(fù)雜性,是一種難以表征的分子。偶聯(lián)藥物有效載荷是對抗Ai癥等疾病的一種有吸引力的方法,但進(jìn)一步增加了異質(zhì)性的復(fù)雜性和風(fēng)險(xiǎn)。抗體藥物偶聯(lián)物 (ADC) 需要像任何其他基于 IgG 的生物制藥一樣進(jìn)行仔細(xì)和詳細(xì)的表征,并且需要適當(dāng)?shù)姆治龉ぷ髁鞒?。Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶將ADC消化成其亞基,可以詳細(xì)表征這類復(fù)雜的藥物。Genovis的內(nèi)切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 還可以研究完整的 ADC,但降低復(fù)雜性并提高分辨率。浙江FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗體酶切Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶,在隨時(shí)可用的離心柱中,這可以大限度地減少在樣品中殘留的酶。
與IdeS不同,Genovis的GingisKHAN(Kgp)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)(KSCDK/THTCPPC)消化人IgG1,產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點(diǎn)是人IgG1三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果,使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現(xiàn)額外的消化位點(diǎn)。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性,并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑(2mM半胱氨酸)與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物,研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應(yīng),并鑒定翻譯后修飾。
Genovis的FabRICATOR是一種半胱氨酸蛋白酶,它對許多不同的物種和IgG亞類都有活性,包括人IgG亞類1-4以及猴子、兔子、大鼠和綿羊IgG的一些亞類。FabRICATOR在鉸鏈下方的單個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化,生成F(ab’)2和Fc/2子基,可以進(jìn)一步還原生成Fd’,輕鏈和F/2子基是必需的。FabRICATOR(IdeS)通過蛋白-蛋白相互作用與目標(biāo)抗體工作,這說明了它的高特異性。事實(shí)上,它在單個(gè)位點(diǎn)消化意味著使用FabRICATOR時(shí)沒有過度消化的風(fēng)險(xiǎn),其高特異性也意味著相同的消化方案可以作為平臺方法應(yīng)用于許多不同的抗體。FabRICATOR(IdeS)不需要還原條件來獲得良好活性,也不需要任何額外的輔助因子,它將在不同生理緩沖中發(fā)揮作用。這意味著按照下面的鉸鏈消解,您將生成F(ab’)2和Fc/2片段用于分析或其他應(yīng)用。例如氧化、糖基化等翻譯后修飾,可以用IdeS酶。
蛋白酶用于生成肽,用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學(xué)和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導(dǎo)的偽影,傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的,因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶,可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比,所得肽更長,并可能導(dǎo)致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復(fù)雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物,使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個(gè)精氨酸和一個(gè)賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性,即使在長時(shí)間孵育過夜后,酶與底物的比例也很高(1:5)。然而,ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性,但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1:20 和過夜孵育下,證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下,GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實(shí)了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性,并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物。山東GingisREXIdeS蛋白酶抗體酶切
在抗體及核酸藥領(lǐng)域,倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程,抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。湖南GingisKHANIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶
Genovis是一家瑞典生物技術(shù)公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨(dú)特、快速且易于使用的酶學(xué)工具,主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。我們在全球范圍內(nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應(yīng)用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個(gè)“SmartStories”,也可以聯(lián)系我們。湖南GingisKHANIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶