與IdeS不同,Genovis的GingisREX(RgpB)是一種精氨酸特異性蛋白酶,可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質,包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化;在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化;產生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶,可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基,包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比,可生成更長的肽,胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質譜進行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇,以實現替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性,通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內具有活性,它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱,用于亞基的親和純化。FabULOUSIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶
大多數zhiliao抗體攜帶人 IgG1 骨架,雙特異性或多特異性形式的開發正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,例如單價結合、二硫鍵擾亂和配對 Fc 糖基化。傳統方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化,這需要優化以大限度地減少過度消化并獲得足夠的產量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE) 在鉸鏈上方的一個特定位點消化人 IgG1,以產生完整的 Fab 和 Fc 片段。該酶在大多數人IgG1 上也具有活性,其中鉸鏈區域以下的突變已被引入。為了證明FabALACTICA的性能,我們消化了不同的人IgG1抗體,并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后觀察到的定義峰顯示了不同人IgG1抗體的均質片段生成和強大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。山東GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學可精確定位特定的修飾。而無需肽圖分析,可以較少的手動操作時間快速完成。
Blinatumomab(一種對 CD19 和 T 細胞標志物 CD3 具有特異性的 BiTE 分子)的研究級生物仿制藥在室溫下用固定化過夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通過LC-MS對消解樣品的直接分析表明,所有三個連接子區域均被消解,α-CD3 VL和VH鏈洗脫為一個色譜峰,α-CD19 VH和VL鏈作為單獨的峰洗脫。來自連接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 結構域的小峰顯示該短連接子未完全消化,表明 GlySERIAS 對短連接子的活性較低。與完整的蛋白質分析相比,四個結構域的分離提供了具有單同位素分辨率的高質量光譜。可以觀察到每個結構域的幾個不同變體,剩余的連接子殘基數量不同。在色譜分離過程中,α-CD3 VH結構域無法從α-CD19 VH結構域完全基線分離,導致在相關質譜中觀察到一些共洗脫。四個結構域的分離產生了有關在完整蛋白質水平上鑒定的蛋白質修飾位置的信息。例如,在完整水平上鑒定的 37 Da 的蛋白質修飾被分配給 α-CD3 VH 鏈。此外,240Da 和 320da 的兩個修飾分別被分配給 α-CD3 VL 結構域。后者還含有一個帶有五六個組氨酸殘基的 His 標簽。這些數據證明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 對包含多個柔性連接子蛋白進行質量控制的中級工作流程的強大功能。
如果您想分析單克隆抗體或單克隆抗體分子,現在有了Genovis的一些新產品(IgA酶,IgM酶),其他的模式和分子形式(IdeS高通量的產品形式)來測定和監測許多不同的CQA,Genovis可以緩解使用不同分析方法時可能出現的瓶頸。 生產大量的樣品當然很好,但如果分析團隊不能足夠快地處理它們,那就沒有什么意義了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法,當然這些方法要快速,而且可能易于自動化。 這正是我們所能提供的,這使Genovis能夠支持更多不同功能的客戶。瑞典生物技術公司Genovis提供IdeS蛋白酶等,用于mAb、ADC藥物的開發、生產和質量控制。
為了讓所有實驗室都能同時快速自動消化多種抗體,Genovis的FabRICATORMagIC的設計具有靈活性,適用于一系列自動化平臺。我們在ThermoScientific?KingFisher?純化系統上優化了FabRICATORMagIC的工作流程,但它可以轉移到其他自動化平臺,如果沒有自動化,在振動臺上也能同樣出色地工作。消解后,將含有處理樣品的深孔板直接轉移到LC-MS的自動進樣器中進行快速色譜分析,或轉移到其他分析方法進行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容,以極大限度地減少自動化系統中可能發生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時,樣品制備非常簡單。將樣品、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中,然后將板放入儀器中。設計用于FabRICATORMagIC的BindIt?協議將控制每個步驟的孵育溫度和時間。通過高分辨率質譜進行分離和鑒定:酶解曲線和更高的序列覆蓋率。海南GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學
IgASAP Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1,產生完整且均質的 Fab 和 Fc 片段。FabULOUSIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶
作為免疫系統的重要組成部分,IgA在自身免疫性疾病、過敏反應、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發揮作用。在天然條件和復雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫學和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結構差異是鉸鏈區域。與IgA2相比,IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區域,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。FabULOUSIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶