第二種***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化學公司HoechstAG生產。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是鄰苯二甲酰亞胺，具有向A-T富集區插入的趨勢，因此后者不常使用。與DAPI相似，此類染料受到紫外線激發并在455nm下發射比較大值，在無結合狀態下變為510–540nm。Hoechst染料還具有細胞滲透作用，因此可用于固定細胞和活細胞。與DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色劑碘化丙啶無法透過細胞膜。在細胞培養中，因為該染色劑無法進入完好的細胞內，所以常常被用來區分活細胞和死細胞。碘化丙啶也是一種結合劑，但對不同的堿基沒有特異性。在核酸結合態下，其比較大激發波長為538nm，比較高發射波長為617nm。未結合狀態下碘化丙啶的比較大激發和發射被移到較短的波長和較弱的強度。它也可以在不改變其熒光特性的情況下與RNA結合。要區分DNA和RNA，必須使用足夠的聚合酶。異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術中。山東細胞膜熒光染料

CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫，是由奇數個甲基單元連接的兩個氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長長、吸收和發射可調、消光系數高的特點CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標記，對于蛋白抗體的標記，可以通過簡單的混合反應來完成結合，下面我們介紹了蛋白抗體標記的標記方法，具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標記效果，請制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0，應使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL，標記效率會**降低。為獲得比較好標記效率，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中，和銨離子，否則會影響標記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制備成10mM儲備液。通過移液器或渦旋混合均勻計算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個可進行后續標記實驗。山東細胞膜熒光染料DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）對活細胞進行多色成像和流式分析。

D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產生典型的黃綠色光。該反應的 560 nm 化學發光在幾秒鐘內達到峰值，當底物熒光素過量時，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報告基因。化學發光技術幾乎沒有背景，使得 luc 報告基因成為檢測低水平基因表達的理想選擇。標準閃爍計數器可以可靠地測量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達報告者的作用外，熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測中[1]。我們提供螢火蟲熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。

過標記——計算結果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團大于10mol。雖然過標記的蛋白也可以使用，但可能會引起蛋白的聚集、降低抗體結合抗原的特異性，這些都會造成非特異性結合。過標記還會引起熒光淬滅。可以增加蛋白或減少反應時間。3．未結合染料難以去除——盡管大部分時候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯物，但仍可能會有痕量的游離染料留在偶聯物溶液中，會使標記計算的值偏高。可用分離柱再次分離或透析去除。4．蛋白或蛋白偶聯物無法洗脫——不要再加緩沖液，只需再次離心一次或幾次。SUPER Green I核酸染料特點 。

二、***成像分析：D-熒光素，鉀鹽，D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液（15mg/ml），0.22μm濾膜過濾除菌（避光），分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存，避免反復凍融。使用時4℃融化，實驗前平衡至室溫（避光）2、注射量取決于注射方式，具體如下：注射方式劑量靜脈注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射（27gauge針頭）50μl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液鼻內注射（pipette）50μl，濃度為3mg/ml熒光素工作液3、注射入體內10-20min（待光信號達到**強穩定平臺期），再進行成像分析D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產生典型的黃綠色光。廣西細胞膜熒光染料

CY5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩定的熒光標記試劑。山東細胞膜熒光染料

羰花青染料***用作Di來標記細胞、細胞器、脂質體、病毒和脂蛋白。長鏈羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于標記膜和其他疏水結構。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它們在脂質環境中具有極高的消光系數、環境依賴性熒光和短的激發態壽命。它們在室溫下是油狀物，在水中發出微弱熒光，但當摻入膜中或與親脂性生物分子結合時，它們發出高熒光且相當耐光。這些光學特性使它們成為細胞質膜染色的理想選擇。一旦應用于細胞，這些染料就會在質膜內橫向擴散，導致整個細胞染色[1]。DiO、DiI、DiD和DiR呈現出不同的綠色、橙色、紅色和紅外熒光，從而促進活細胞的多色成像和流式細胞術分析。DiO和DiI可分別與標準FITC和TRITC過濾器一起使用。其中DiI及其類似物是**常用的，因為它們通常表現出非常低的細胞毒性。此外，DiI***用于測定LDL和HDL等脂蛋白。親脂性氨基苯乙烯基染料DiA也常用于神經元示蹤[2]。山東細胞膜熒光染料

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