Cy7DiC18(DiR)是一個親脂性、近紅外熒光花青染料。這個染料常用于標記細胞質膜。Cy7DiC18(DiR)的兩個18-碳鏈插入到細胞膜,從而進行特定的、穩定的細胞染色,幾乎不會發生細胞間的染料轉移。Cy7DiC18(DiR)(近紅外熒光)和其他細胞膜熒光染料如DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)配合使用,為多色成像和流式細胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18(DiR)染色后可進行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他試劑)的固定,但不建議在染色后進行透化的過程。此外,在固定透化(室溫下用0.1%TritonX-100透化)后,也可以很好地進行質膜染色。
1、Cy7DiC18(DiR)染色固定的細胞或組織樣品時,通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進行固定,使用其它不適當的固定液會導致熒光背景較高。
2、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織,在小動物成像中用來示蹤。石家莊熒光染料DAPI
3.粘壁細胞的染色(1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養。(2)從培養基中移走蓋玻片,吸走過量培養液,將蓋玻片放在潮濕的環境中。(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。(4)在37℃培養細胞2~20分鐘,不同的細胞比較好培養時間不同。(5)吸干染料工作液,用培養液洗蓋玻片2~3次,每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞,培養5~10分鐘,然后吸干培養基。
4.顯微鏡檢測(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。(2)多色染料的同時檢測,濾光器按照以下設定:a)DiI和DiO=OmegaXF52,Chroma51004;b)DiI和DiD=OmegaXF92,Chroma51007;c)DiI,DiO和DiD=OmegaXF93,Chroma61005
5.流式細胞儀的檢測DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染色的細胞可以分別用經典的FL1,FL2,FL3和FL4流式細胞儀檢測。 石家莊熒光染料DAPICy3染料的激發峰和發射峰分別在550 nm和570 nm左右。
熒光染料:能發出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后,能把短波長的光轉變為波長較長的可見光波而反射出來,呈閃亮的鮮艷色彩。例如,酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環或雜環并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用,也可以組合成復合熒光染料使用。其中復合熒光染料是利用熒光共振能量轉移技術合成的熒光染料,由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復合染料在受體分子的激發波長被激發,在供體分子的發射波長發射一個光子。熒光染料發展非常迅速,已開發的用于科研和臨床應用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料,具有廣泛的應用,作為抗體和其他探針標記,用熒光顯微鏡,流式細胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實驗。熒光素衍生物具有高吸收率、優異的熒光量子產率和良好的水溶性,是流式細胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標記之一。**常用的熒光素包括用于標記蛋白質(特別是抗體)的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于標記肽和寡核苷酸的羧基熒光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯物,以及一系列具有針對細胞標記和檢測優化的特性的質量iFluor?熒光標記染料。Cy3 (Cyanine 3) 是一種發橘黃色熒光的花青素熒光染料。
三、細胞實驗D-熒光素鉀鹽體外生物發光試驗:D-熒光素鉀鹽,無菌純水,完全培養基(自行配制)1、貼壁細胞:將細胞接種于培養板中孵育數小時或過夜,使細胞貼壁。懸浮細胞:可以將細胞接種于培養板后直接進行后續操作,無需孵育。如果倍增時間相對較短,則應考慮倍增時間進行細胞計數。2、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無菌水中,制備成100X熒光素儲備液(15mg/ml),輕輕顛倒搖動至熒光素鉀鹽完全溶解。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。3、用預熱好的細胞培養基1∶100稀釋100X熒光素儲備液(15mg/ml),配制成熒光素工作液(終濃度150μg/ml),即配即用。4、去除培養板中的培養基。5、在成像前,將適量熒光素工作液加入細胞中,然后進行圖像分析。注意:成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。孵育時間取決于特定的細胞類型。一般來說孵育10分鐘就足夠了,根據需要進行測試和調整。6、每隔10分鐘,**多40分鐘,使用VILBERFUSIONFX成像系統檢查體外生物發光,確定動力學曲線并找出細胞的峰值成像時間點Super Fluor 750(效果同Alexa Fluor 750)熒光染料。河北神經熒光染料
動物體內光學成像主要采用生物發光與熒光發光兩種技術。石家莊熒光染料DAPI
其他細胞結構常用染料生物染料在細胞結構和組分鑒定中有著廣泛的應用,除細胞膜研究外,我們經常也會對一些其它細胞結構及成分進行探索,例如線粒體、溶酶體、蛋白質、細胞核等,而對于不同的細胞結構有不同的染料進行染色細胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于細胞核染色,可將細胞核染成藍色。鬼筆環肽(Phalloidin)是細胞骨架的染色神器,羅丹明標記的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可將細胞染成橙紅色,DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態變化時經常用到的兩種共染的試劑,染色效果可見A1-E1用TRITC-鬼筆環肽(橙紅)染色的細胞骨架免疫熒光圖;A2-E2用DAPI(藍色)染色的細胞核免疫熒光圖;A3-E3合并的L929細胞免疫熒光染色圖。是S100A16過表達或下調前后PDAC細胞形態的變化。石家莊熒光染料DAPI